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第三章 酶的生产、分离和纯化 酶来自生物体，包括动物、植物和微生物。 酶的生产：经过预先设计，通过人工操作控制而获得所需要酶的过程。 酶生产的方法： 1、提取 2、化学合成 3、发酵法 第一节 酶的发酵生产 50年代后期酶生产的主要方法，指利用动植物细 胞或微生物细胞，主要是微生物细胞的生命活动而获得人们所需要的酶的过程，称为酶的发酵生产。 1894年，日本人高峰让吉首次用米曲霉固体发酵生产淀粉酶作为消化剂。 1917年，Boidin与Effront以枯草杆菌生产淀粉酶用于织物退浆。 1947年，日本开始采用液体深层发酵生产a-淀粉酶。 利用微生物发酵方法制取酶的优点是： 1）微生物种类繁多，酶种丰富，且菌株易诱变，菌种多 样； 2）微生物生长繁殖快，发酵周期短，易提取酶，特别是胞外酶； 3）微生物培养简单，培养基来源广泛，价格便宜。 4）可采用微电脑等技术控制酶发酵生产过程，生产可连续化、自动化，经济效益高。 5）可利用以基因工程为主的现代分子生物学技术，选育新菌种、增加酶产率和开发新酶种。 1、产酶菌的获得 1）生产菌的要求 安全可靠，不是致病菌，在系统发生上与病原体无关，也不产生毒素。FDA (Food and Drug Administration)鉴定、审核后认为可用于食品工业和医药工业的生产菌有：枯草杆菌（Bac. subtilis）、黑曲霉（Asp. niger）、米曲霉（Asp. oryzae）、啤酒酵母（Sac. cereusia）、脆壁酵母（Sac. fragieis）。 不易变异退化、不易感染噬菌体，产酶稳定性好。 产酶量高，酶的性质符合应用需要，最好是产胞外酶的菌株。 能利用廉价原料，发酵周期短，容易培养。 产酶菌可从菌种保存机构如ATCC（American Type Culture Collection）和有关研究机构获得；一般都是通过筛选（screening）得到。筛选包括以下环节：菌样采集，菌种分离、纯化和生产性能鉴定。 2）常见的产酶微生物 细菌： 枯草杆菌 淀粉酶 制糖、脱浆 大肠杆菌 青霉素酰化酶 制备青霉素母核 异型乳酸杆菌 葡萄糖异构酶 制果糖 短小芽孢杆菌 碱性蛋白酶 皮革脱毛 酵母： 假丝酵母 脂肪酶 、尿酸酶等 乳品增香、绢丝脱脂等 啤酒酵母 用于酿造啤酒、饮料酒和酒精等 霉菌： 黑曲霉 酸性蛋白酶 啤酒澄清、医药 红曲霉 葡萄糖淀粉酶 制葡萄糖 米曲霉 糖化酶和蛋白酶 制果糖 青霉 葡萄糖氧化酶、苯氧甲基青霉素酶、果胶酶等 木霉 纤维素酶 根霉 淀粉酶、酸性蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等 毛霉 蛋白酶、糖化酶、果胶酶、凝乳酶等 3）菌样采集 为获得能够降解某种物质的产酶菌株，一般可从该物质比较丰富的地方寻找。相近菌种产生的酶在性质上一般相近或相似。 胞外酶的稳定性和最适反应条件通常和菌的最适生长条件一致；但胞内酶的热稳定性通常比菌的最适生长温度稍低。 4）菌种分离、纯化和生产性能的鉴定 产酶菌可采用平板划线法或直接稀释法分离纯化。 初筛多采用平板透明圈法。如筛选水解酶的生产菌，可以该酶的底物作为平板培养基的主要碳源或氮源，这样如果菌株包含所需要的酶，经过一段时间的培养后，就会在菌落的周围形成一透明的水解圈（clearing or lysis zone），从透明圈的大小可大致判断出菌株的产酶能力。 5）产酶菌的筛选： 主要依靠其催化的反应的性质、底物和产物的特异性等进行设计。 胞外酶筛选： 使待检测的微生物在含有酶作用的不溶性底物如淀粉、纤维素、酪素、细胞壁等作为培养基中生长，培养后，根据菌落周围产生的透明圈的大小可以晒选到产淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶和溶菌酶的高活性菌株。(平板透明圈法) 根据催化反应的产物的酸碱