《毒理学基础》14第18章 肾脏毒理学【参考】.pptVIP

尿酶 尿酶可来自肾单位脱落溶解的细胞、血浆中经肾小球滤过后未被重吸收的小分子蛋白质、其它泌尿道上皮细胞。 尿酶是肾损害早期和敏感的指标之一，对急性肾损害比对慢性肾损害更有意义。 尿中碱性磷酸酶和-谷氨酰转移酶活性增高，是刷状缘受损的标记； 尿中存在细胞浆或线粒体内的酶如乳酸脱氢酶、谷氨酸脱氢酶活性升高，是广泛细胞损伤的标记。 注意：尿酶活性正常，并不能说明没有肾损伤，因其大部分在早期即已随尿排出。 动物试验中，应选用肾酶分布与人接近的动物大鼠。 菊糖清除试验 菊糖是一种多糖，能被肾小球滤过，但不被肾小管重吸收或分泌，在体内不被代谢，也不与血浆蛋白结合。在静脉注射菊糖后，收集一定时间内的尿液，然后测定血浆和尿中的菊糖浓度，按下式计算其清除率，以反映肾小球的滤过功能。 菊糖清除率（ml/min）= 尿量（ml） X 尿中菊糖浓度（mg/L） 血浆中菊糖浓度（mg/L） 内生肌酐清除率测定 肌酐为肌酸的代谢产物，其滤过后肾小管无任何吸收，内生肌酐清除率测定的意义同菊糖清除率测定的意义相同。 内生肌酐清除率（升血浆/24小时）= 尿肌酐浓度（mg/L） X24小时尿量（L） 血浆肌酐浓度（mg/L） 血清肌酐和血尿素氮测定 血清肌酐和血尿素氮可间接反映肾小球滤过率，但没有菊糖清除率和内生肌酐清除率灵敏。 在肾小球滤过率下降50%-70%的情况下血清肌酐和血尿素氮才会增高。 且在脱水、少尿、蛋白分解代谢增强时血清肌酐和血尿素氮也会升高。 肾对氨基马尿酸清除试验 血中对氨基马尿酸（PAH）几乎全部通过肾脏分泌而被清除，血中PAH经过肾脏时，被清除的量与肾血流量成正比，其清除值可看作肾有效肾血流量（ERPF），再用红细胞比容进行校正，可求出肾血流量（RPF）。 ERPF=（尿中PAH 浓度 X 每分钟尿量）/血浆中PAH 浓度 RPF=ERPF/（1-红细胞比容） 形态学和酶组织化学检查 急性或慢性毒性试验结束时，需常规称量肾脏和体重，计算脏器系数。脏器系数改变，提示可能有肾脏损害。 大体检查还能发现肾脏有无充血、水肿、纤维化等病理改变。 镜检能发现肾脏在组织学及亚细胞水平上损害的部位、范围、性质、形态学特征及严重程度。 酶组织化学检查能对某些病损或某些功能（如一些酶活性）进行定位研究。 5.2 离体试验 离体试验可对肾功能和肾毒性检测在肾单位、甚至部分肾小管水平进行，更有利于对毒作用机制的阐明。 离体试验周期短、成本低、可同时检测多种化学物。 5.2.1 肾皮质薄片或肾组织片段培养 5.2.2 离体灌注肾小管技术 5.2.3 其他试验技术 5.2.1 肾皮质薄片或肾组织片段培养 该试验是先将肾皮质用组织切片机切成0.2-0.5mm的薄片，然后置入一定的培养基中培养，培养基中加入待测的化学物，经过一定时间后，测定培养基和薄片中化学物的比值。 该试验主要反映肾皮质细胞对化学物质的转运能力。 5.2.2 离体灌注肾小管技术 该技术是将肾小管分离出来后，再进行灌注试验。 该技术复杂、难度大，且需在显微镜下操作。 最佳的试验动物是家兔。 5.2.3 其他试验技术 包括有： 离体肾灌注； 原代肾细胞培养； 亚细胞器分离； 建立肾细胞株。 6 几种常见的肾毒物 汞 镉 氯仿 四氟乙烯 溴化苯 汞 汞进入体内可在组织细胞中迅速氧化成无机汞。 汞在体内可与含巯基的化合物（包括含巯基酶、蛋白质、氨基酸）发生特异结合而影响其功能。 肾脏是无机汞蓄积的主要器官。无机汞的急性肾毒性，一般在接触后48小时内产生肾近曲小管坏死和急性肾功能衰竭；慢性无机汞接触可产生抗肾小球基底膜抗体，并有免疫复合物形成，引起免疫反应性膜性肾小球肾炎。 镉 镉可通过食物、吸烟、职业粉尘、烟尘进入人体。其生物半衰期长达十年至几十年，体内负荷的50%在肾脏。 镉进入体内可与金属硫蛋白结合，可被肾小球滤过。被肾近曲小管重吸收后，在小管细胞溶酶体酶降解而游离出镉，并引起近曲小管损伤，进而发展成慢性间质性肾炎。 氯仿 氯仿对肾毒性的靶位是近曲小管。 氯仿先通过肾细胞色素P450活化。 活化成的亲电子产物，可与细胞大分子的亲核基团共价结合，从而影响细胞的正常功能。 生成不稳定的三氯甲烷，释放出盐酸并形成光气（碳酰氯，COC12），光气遇水会分解成为一氧化碳和盐酸，并与2分子谷胱甘肽反应产生二硫碳酸谷胱甘肽，从而造成近曲小管损伤。 四氟乙烯 四氟乙烯在肝中由GSH-S转移酶代谢成1,1,2,2-四氟乙烯谷胱甘肽，随胆汁排入肠道，降解成胱氨-S结合物，最后通过有机阴离子转运系统和钠非依赖性转运系统转运到肾脏作为胞浆和线粒体中胱氨酸结合物β溶酶的底物，分解产生氨、丙酮酸和活化巯基。 活化巯基能与细胞大分子发生共价结合，从而引起肾近曲小管功能损伤和细胞坏死，并伴有脂质过