CTAB 提取DN配方CTAB 提取DNA配方.doc

CTAB 十六烷基三甲基溴化铵 别称:西曲溴铵、溴棕三甲基铵、溴烷铵，鲸熔三甲基溴化铵；CTAB；CTMAB；HTAB；CTABr；阳性皂 　　英文名 Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide；Cetrimonium Bromide 　　分类 季铵盐 　　 ?? 　　分子式 C16H33(CH3)3NBr 　　分子量 364.446 　　熔点：250-237℃ 　　溶解性：13 g/L (20°C) 　　密度：1.3220 g/ml  CTAB 提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl （pH8.0），20 mmol/L EDTA-Na2，1.4mol/LNaCl（如表1），2% CTAB，使用前加入0.1%（V/V）的β-巯基乙醇。 提取DNA配方 　　CTAB为十六烷基三甲基溴化铵， 　　CTAB提取缓冲液的经典配方 　　Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏； 　　EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性； 　　NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中； 　　Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。 　　CTAB 4g 　　NaCl 16.364 g 　　1M Tris-HCl 20ml( PH8.0) 　　0.5M EDTA 8ml，先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌 　　冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇（400ul）氯仿-异戊醇（24：1）：先加96ml氯仿，再加4ml异戊醇，摇匀即可。 提取RNA配方 　　2% CTAB（W/V） 　　2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V） 　　100 mM Tris-HCl（pH8.0,DEPC处理的水配置） 　　25mM EDTA 　　0.5g/L 亚精胺Spermidine 　　2.0M NaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入） 由于在高温灭菌条件下，Tris-HCl要和DEPC发生反应，所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC 处理的水配制即可。  　CTAB法提取植物DNA CTAB提取缓冲液配方：1mM Tris-HCl ( PH8.0)；20mM EDTA( PH8.0)；1.4 M NaCl；2% CTAB（W/V）；2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V）。 　　 （1）取材料（3片叶）移入1.5 ml Eppendorf管中，迅速加液氮研磨成粉末状； （2）加入600 μl的CTAB提取缓冲液（CTAB在65℃水浴预热），加3 μl β-巯基乙醇（0.2-1%），混匀，60-65℃水浴30min-1h。每5min轻轻摇动几次，开始可以颠倒，后期轻缓； （3）30min后，加入1/3V的5M KAc 混匀冰浴30min，4℃，12000 r/min，离心15 min； （4）小心吸取上清液，移入新的1.5 ml Eppendorf管中，加入等体积的冷冻 氯仿-异戊醇（24：1），混匀，4℃，12000 r/min，离心10 min。 （5）重复步骤（4）1-2次，以蛋白层不出现为止； （6）取上清，加等体积冷冻异丙醇，混匀，-20℃沉淀40min，4℃，12000 r/min，离心10 min； （7）弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀1-2次，12000 r/min，离心10 min； （8）室温下干燥后（一般干燥5-15 min），溶于20-30 μl去离子水中，加1μl RNase （10μg /μl，终浓度10μg /ml），37℃水浴保温30 min，于-20℃或者-70℃下保存备用。 若要纯化DNA，可做下列操作 （9）加入等体积 冷 氯仿-异戊醇（24：1），混匀，4℃，12000 r/min，离心10 min。 （10）取上清，加1/10V 3M NaAc（pH5.2）和2V冷冻无水乙醇，混匀，-20℃沉淀40min，4℃，12000 r/min，离心10 min； （11）弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀1-2次，12000 r/min，离心10 min； （12）超净台上晾干（吹干），用20-30μl去离子水溶解，-20℃或者-