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第十章 色谱分离过程 第一节 概 述 一、色谱法的由来 1．1906年由俄国植物学家Tsweet创立 植物色素分离见图示 40年代 TLC，纸色谱 50年代 GC出现使色谱具备分离和在线分析功能 60年代末 HPLC出现，使色谱分析范围进一步扩大 2．现在：一种重要的分离、分析技术 分离混合物各组分并加以分析 图示 固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。 与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。 两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础 三.色谱法的特点 第二节 色谱分离过程的基本原理 一、分离原理 色谱分离过程的实质是溶质在不互溶的固定相和流动相之间进行的一种连续多次的交换过程，它借助溶质在亮相间分配行为的差别而使不同的溶质分离。 分配系数的微小差异→吸附能力的微小差异 微小差异积累→较大差异→吸附能力弱的组分先流出； 吸附能力强的组分后流出 二、固定相（色谱柱填料） 1.固体固定相 a 常用的固体吸附剂：活性炭，硅胶，氧化铝，分子筛等 作用机理：吸附占主导地位 b 新型的固体固定相：高分子多孔微球 低温时，吸附占主导地位，高温时分配占主导地位 c 化学键合固定相：分配占主导地位 主要用于分析永久性气体，如低级烷烃、氢、氧、一氧化碳、二氧化碳、氮氧化物、硫化氢等。 2.液体固定相 组成结构：担体+固定液，前者是具有较大比表面、化学呈惰性的一类物质，后者在色谱使用温度下呈液体膜状态，化学性质稳定，不流失或挥发，主要用于分析较高沸点的有机物。 对固定液的基本要求： a 蒸汽压要低，使用温度下为液体 b 热稳定要好，不挥发 c 惰性，与分析物质不产生化学反应。 固定液的选择原则： “相似相溶”，选择与试样性质相近的固定相。 A 非极性样品选用非极性固定液（主要作用力为色散力） 流出顺序：沸点低的先流出，同沸点的极性组分先流出 B 中等极性样品选用中等极性固定液（主要作用力为静电力） 流出顺序：沸点低的先流出，同沸点的极性小的组分先流出 C 强极性样品选用强极性固定液（主要作用力为静电力） 流出顺序：极性低的先流出 三、色谱柱及柱技术 色谱柱的性能依赖于三个因素：色谱柱填充技术、柱设计和生产 1.色谱柱装填方法 高压匀浆填充 干法填充 径向压缩法 轴向压缩法 环形压缩技术 2.色谱柱的设计 多采用大直径、短柱长的“饼式”柱 第三节 色谱的分类 1. 按固定相及流动相的状态分类：液相色谱、气相色谱 2. 按固定相形状性质分类：柱色谱、纸色谱、薄层色谱 3.按色谱过程的机理分类： 吸附色谱：用固体吸附剂作固定相，利用组分在吸附剂上吸附力的不同，因而吸附平衡常数不同而将组分分离 分配色谱：用液体作固定相，利用组分在液相中的溶解度不同，因而分配系数不同进行分离 离子交换色谱：利用离子交换原理 排阻色谱：利用分子大小不同 电色谱：利用带电物质在电场作用下移动速度不同进行分离 4.可按仪器分: a 气相色谱( Gas chromatography ) 填充柱气相色谱（Packed column gas chromatography） 毛细管气相色谱 (Capillary column gas chromatography) 裂解气相色谱(Pyrolysis gas chromatography ) 顶空气相色谱 ( Headspace gas chromatography) 气相质谱联用技术（Gas chromatography-Mass spectrometry） b 液相色谱仪( Liquid chromatography ) 高效液相色谱( High performance liquid chromatography) 超临界流体色谱( Supercritical fluid chromatography) 高效毛细管电泳(High performance capillary electrophoresis) 毛细管电色谱(Capill