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色谱分离技术 1903年，俄国植物学家Tsweet将CaCO3固体粉末装入竖立的玻璃管中，从顶端倒入植物色素的石油醚浸出液，并用石油醚连续地冲洗。结果在柱中出现了颜色不同的色带。因此，Tsweet把这种方法称为色谱法。 ◆ 1903年 Tswett创立色谱法（在碳酸钙上分离了叶绿素）。　 由Tswett创立的色谱法分离效率低，分离时间长，根据样品的不同，一般分离需要几小时至几天。 如今，色谱法不仅用于有色物质的分离，而且大量用于无色物质的分离。所以色谱法已经失去原来的含义。但是，现在仍沿用色谱法这个名称。 色谱法具有分离及分析两种功能。它是分析混合物最有力的手段。 色谱分离是目前应用最广泛的分离方法。已广泛地用于石油化工、有机合成、生理生化、医药卫生、环境监测、刑事侦查、生产在线控制，乃至空间探索等许多领域，以解决各种分离分析课题。 什么是色谱法？ 色谱法是一种分离、分析方法，有时又称为层析技术。它利用被分离的诸物质在互不相溶的两相中分配系数等的微小差异进行分离。当两相作相对移动时，使被测物质在两相之间进行反复多次分配，使原来微小的差异累加产生了很大的效果，形成差速迁移，使各组分在柱内移动的同时逐渐分离，以达到分离、分析及测定一些物理化学常数的目的。 色谱过程 1．色谱法的特点： —与经典的分离提纯手段（重结晶，升华，萃取和蒸馏等）相比，色谱法具有快速，简便和高效率等优点。并能对复杂化合物，甚至立体异构体进行分离。 —液相色谱（含柱，薄层色谱）适合于固体物质和具有高蒸汽压的油状物的分离，不适合低沸点液体的分离。 —气相色谱适合于容易挥发物质的分离。 2．色谱法的优点 （1）分离效率高。 （2）应用范围广。 （3）分析速度快。 （4）样品用量少。 （5）灵敏度高。 （6）分离和测定一次完成。可以和多种波谱分析仪器联用 （7）易于自动化，可在工业流程中使用。 色谱分类 2.根据操作压力的不同分类 低压色谱 0.5MPa 中压色谱 0.5～5MPa 高压色谱 5 ～ 50MPa 3.按操作形式： 柱色谱— 分离体系采用圆柱管 纸上色谱—固定相是滤纸或将固定相载于纸上 薄层色谱—固定相是一层吸附剂物料，平铺于惰性平板上 凝胶色谱 利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、 吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。 色谱相关术语 试样经色谱柱获得分离，按先后次序经过检测器时，检测器就将流动相中各组分浓度变化转变成电信号，由记录仪记录下信号—时间曲线，称为色谱流出曲线或色谱图。 由色谱图可直接得到的相关术语： 基线 色谱峰 色谱时间 由色谱图可间接得到的相关术语： 色谱体积 相对保留值 基线(Baseline) 在色谱操作条件下，仅有流动相通过检测器时，由记录仪得到的信号—时间曲线。 色谱峰(Chromatographic peak) 流动相带着组分通过检测器时，由记录仪得到的信号—时间曲线。 色谱峰区域宽度(Peak width) 是色谱流出曲线的一个重要参数，它直接反映了分离条件的好坏。习惯上有下面三种表示方法： 1）标准偏差：峰高0.607处色谱峰宽度的一半,用σ表示。 2）峰宽或基线宽度：通过峰两侧的拐点作切线与峰底相交的宽度，用Y表示。与标准偏差的关系为：Y=4σ。 3）半峰宽：峰高一半处色谱峰的宽度,用Y1/2表示。与标准偏差的关系为：Y1/2=2σ(2ln2)1/2。 色谱时间 色谱时间主要有： 死时间（Dead time）：不被固定相吸附或溶解的惰性组分，从进样到出峰的峰顶点之间测得的时间,用tM表示。 保留时间（Retention time）：从进样到组分峰顶点之间测得的时间，用tR表示。 调整保留时间(Adjusted Retention Time)：调整保留时间指组分的保留时间扣除死时间后的时间，用tR’表示。tR’=tR-tM 色谱体积 色谱体积主要有： 死体积（Dead Volume）：死体积指色谱柱填充固定相后的空隙体积，又指在死时间内流动相流经色谱柱的体积。死体积通常用Vm表示。 Vm= tM×FC Fc表示流动相的体积流速（mL/min） 保留体积（Retention Volume）：保留体积指从进样开始，到检测器中样品浓度最大时，流动相流经色谱柱的体积。通常用VR表示。 VR= tR × FC 调整保留体积(Adjusted Retention Volume)：调整保留体积指保留体积扣除死体积后的体积