南农生物技术制药第三部分酶工程和手性药物.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * 1） 环糊精及其衍生物 环糊精及其衍生物常用作毛细管区带电泳手性添加剂。2） 2) 冠醚 Ｋuhn等将具有4个手性中心的18-冠6-四羧酸(18C6H4)作手性添加剂,对α氨基酸对映体，重酒石酸去甲肾上腺素，降麻黄碱，phenylglycinol等进行了分离。 3） 抗生素 Armstrong 等将大环抗生素利福霉素B用于毛细管电泳手性添加剂,对18种氨基酸类手性药物的对映体进行分离。最近他们发现糖肽类的抗生素ristocetinA ,teicoplanin ,vancomycin等具有非常广泛的对映体分离选择性,可对上百种对映体进行成功的分离。 4） 蛋白质 蛋白质也被成功地用于毛细管电泳手性分离。此外还有多糖，手性表面活性剂，旋光金属配合物等也用作手性选择剂。 毛细管区带电泳手性添加剂法分离异丙肾上腺素类药物 环糊精及其衍生物常用作毛细管区带电泳手性添加剂。 异丙肾上腺素为碱性化合物，在pH7.00时因质子化而带正电，其电泳方向与电渗流同向。 β-CD是电中性物质，随电渗流一起迁移。所以pH值越小，异丙肾上腺素与β-CD的迁移速度差越大，越有利于对映体的分离。 而CM-β-CD（羧甲基-）在背景电解质中发生电离而变为带有负电荷的阴离子，电泳方向与手性分子相反。 （王洪等，色谱， 1998， 16（1）：22） Fig. 16 The influence of acetonitrile on the separation of enantiomers 3 mm ODS, 50 mm I.D. capillary, 25.9cms packed, 52cms total length, Electrolyte: Acetonitrile/Phosphate buffer pH=6.5, Ratio a) 15:85, b) 20:80, c) 25:75, with 10mM HP- b -CD ( 1mM Na2 HPO4 , adjusted to pH=6.5 with concentrated H3PO4 ), Applied Voltage 15kV, Detection at 220nm. 区带电泳 Chlorthalidone 氯噻酮 is a drug exhibiting diuretic and hypertensive activity, but since it is neutral, its enantiomers cannot be separated by CZE using a neutral chiral selector. HPLC : Cyclobond I 2000 RSP column , CH3CN-70mM triethylamine (5:95 v/v) adjusted to pH 4.1 with acetic acid. Fig. Separations at different acetonitrile concentrations 5 mm HP b CD bonded silica particles, 50 mm I.D. capillary, 27cms packed, 58 cms total length, Applied Voltage 15kV, Detection at 220nm. 电色谱分离 Electrolyte: Acetonitrile/ Phosphate buffer pH=6.5, Ratio 15:85, b) 20:80, 25:75, d) 30:70 ( 5mM Na2HPO4 adjusted to pH=6.5 with concentrated H3PO4 ） 4.4 其他高效手性分离技术 ●?手性超临界色谱（SFC）： 和HPLC相比，超临界色谱可获得较高的分离度和较高的检测灵敏度；和GC相比，它不仅可分离分子量更大的组分，而且可在较低的温度下分离，从而有更好的对映体选择性。手性超临界色谱还可用于对映体的制备分离。 ●?模拟流动相色谱（SMB）：模拟流动床色谱最早用于正己烷和环己烷分离，后来用于间二甲苯和对二甲苯的大规模制备。92年Negawa 等人把它用于手性物质的拆分。模拟流动床色谱手性拆分系统在运行过程中，旋转阀间歇性地开关，控制在不同时间外消旋体的进样、新溶剂的注入和两个旋光异构体的提取位置。 ● 手性膜分离：早期有液块液膜手性分离。最近，有报道采用U-1环糊精聚合物膜拆分氨基酸