高中生物 蛋白质还原糖脂肪的鉴定实验课件 新人教版必修1.pptVIP

生物组织中还原糖脂肪和蛋白质的检测 1、实验原理： （1）斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：由蓝色变成砖红色(沉淀)。斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。葡萄糖、麦芽糖、果糖是还原糖。 （2）苏丹Ⅲ染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色，苏丹Ⅳ染液遇脂肪的颜色反应为红色。 （3）双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1 g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01 g／mL的硫酸铜溶液。蛋白质可与双缩脲试剂产生紫色反应。 5、方法步骤： （１）可溶性还原糖糖的鉴定 （３）蛋白质的鉴定 6、讨论: (1)选取富含还原糖的生物材料时,能用甘蔗或者橘子吗?为什么? 答:不行.橘子本身富含色素,会掩盖颜色反应的结果;而甘蔗不含还原糖,蔗糖不是还原糖. (2)斐林试剂和双缩脲试剂有哪些区别？ a溶液浓度不同:斐林试剂中CuSO4溶液为0.05g/ mL, 双缩脲试剂中CuSO4溶液为0.01g/ mL b使用原理不同:斐林试剂实质是新制Cu(OH)2沉淀, 双缩脲试剂实质是碱性条件下的Cu2+ c使用方法不同: 斐林试剂使用时,先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合,然后立即使用;双缩脲试剂是先加NaOH溶液,然后再加入3至4滴CuSO4溶液 * * 2、实验目的： 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质 3、实验选材： （1）做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。） （2）做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3～4小时（也可用蓖麻种子）。 （3）做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。 4、实验试剂 斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）、 苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、 双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）、 体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。 防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤； 最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。 4. 试管放在盛有50-65℃温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色 → 棕色 → 砖红色（沉淀） 斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu ( OH ) 2在70~90℃下分解成黑色CuO和水； 甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu ( OH ) 2生成。 应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂； 切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。 3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。 2. 取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。 因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。 苹果或梨组织液必须临时制备 1. 制备组织样液。 （去皮、切块、研磨、过滤） 解 释 注 意 问 题 操 作 方 法 时间一长，油滴会溶解在乙醇中。 装片不宜久放。 低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。 滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。 ? 用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。 酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。 ? 用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。 ? 染色时间不宜过长。 在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。 因为浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。 干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。 花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。 解 释 注 意 问 题 操 作 方 法 （２）脂肪的鉴定 以免影响颜色观察 碘液不要滴太多 附：淀粉的检测和观察 用试管取2ml待测组织样液，向试管内滴加2滴碘液，观察颜色变化。 如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。 蛋清要先稀释。 可用蛋清代替豆浆。 先加NaOH溶液，为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液混装或同时加入，会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀，而失效。 否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。