转氨酶实验前讨论课件.pptVIP

谷丙转氨酶的测定（改良赖氏法） 谷-丙转氨酶（ALT），催化丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸： 金氏法（King法）、穆氏法（Mohun 法）和赖氏法（Reitman-Frankel法）。 其原理、试剂、操作步骤及作用温度等完全相同。 不同之处在于作用时间： King法60min ，Mohun法和 Reiman法30min。 King法单位定义是：每1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min，生成1μmol丙酮酸称为一个单位。 Mohun 法单位定义是：每毫升血清在pH=7.4，37℃条件下与底物作用30 min，每生成2.5微克丙酮酸为1单位。 赖氏法没有制定自身的单位定义，而是以实验数据套用速率法的卡门氏单位。 1个卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm的条件下，1ml血清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。 卡门氏单位不是用物质的量浓度，而是用物质的吸光度表示酶的活性单位的。 若将卡门氏单位的定义条件代入国际单位计算公式，即得卡门氏单位与国际单位的换算关系：1卡门氏单位=0.4821 IU/L(25℃)，便可将卡门氏单位兑换成国际单位。 简便，但?-酮戊二酸的干扰使得实验设计上对总体思路的彻底达成有一定难度。 还原辅酶I在340nm处有最大光吸收，因此伴随还原辅酶I不断被氧化，340光吸收值随之下降，下降速率和ALT活力