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体内药物分析 整理者：王思雨绪论体内药物分析是一门研究生物机体中（药物、代谢物和内源性物质的）质与量变化规律的分析方法学，是药物分析的一个重要分支。生物样本包括生物体的各种器官、组织和体液。分析对象：母体药物及其代谢产物、必要的内源物质、与之相关的其他药物。体内药物分析的任务：分析方法学的研究和完善（首要任务）、体内药物的测定和研究、内源性物质的测定和研究体内药物分析的特点：干扰物质多、样品量少、不能重复取样、被测成分浓度低、要求快速提供结果、有一定的仪器设备、工作量大、待测物的易变性。第一章1.选取生物样品的一般原则：能反映药物浓度与药物效应之间的关系、易获得、便于处理，适合于分析、根据不同目的与要求2.血药总浓度（结合型和游离型）当药物与血浆蛋白的结合率稳定时，血药总浓度可以有效地表示游离药物浓度 样品处理：血浆 (plasma)全血 + 抗凝剂（肝素，等）→2500至3000rpm离心5~10min→上清液血清 (serum)全血→放置30min至1h→2500至3000rpm离心5~10min→上清液全血 (whole blood)全血 + 抗凝剂（肝素等）→混合尿液：收集服药后一定时间内（8、12、24h…）尿样，记录体积，混合均匀后取一定量, 测定尿中药物浓度，计算一定时间内尿中药物的累计量。尿中药物浓度变化较大，其变化不直接反映血液中药物浓度，因此，两者相关性较差，在药动学、生物利用度研究方面应用较少。用于：药物剂量回收，肾清除率，代谢物类型研究，及人群代谢分型研究。唾液：漱口15min后收集口内自然流出或经舌在口内搅动后流出的混合唾液，离心后取上清液。与血浆药浓相比，唾液中药物浓度变化较大，且浓度较低。蛋白含量低，内源性物质少，便于前处理。6.组织器官新药临床前药动学研究（组织分布研究）临床中毒死亡的原因分析、司法鉴定通常需要先制备组织匀浆7.头发：主要用于体内微量元素的分析（发硒）、滥用药物和兴奋剂检测、毒物分析（砷）8.生物样品取样：包括服药前空白血样、在曲线的峰前至少4个点、峰后6个及以上，峰附近应有足够的点，总采样点不少于12个（不包括空白）。取样持续到3-5个半衰期或者血药浓度为C max 的1/10-1/20。 治疗药物浓度监测时，需连续给药，经过5个半衰期，血浓达到稳态后取样。样品预处理目的：使药物或代谢物游离，便于测定总浓度；使被测物纯化、浓集；消除干扰；防止对分析仪器的污染。10 常用去蛋白的方法：蛋白质沉淀法和组织酶消化法蛋白质沉淀法 ：生成不溶性盐：酸类（TCA、HClO4等） 重金属盐（Zn2+ 、Cu2+ 、Ag+ ）盐析和脱水：中性盐（ （NH4）2SO4 、NaCl ） 能与水混溶的有机溶剂（甲醇、乙腈、丙酮）缀合物的水解：含有羟基、氨基、羧基、巯基的药物或代谢物分子与葡萄糖醛酸结合成苷，与硫酸形成酯。这些缀合物的极性均较母体大，亲水性强，不易被有机溶剂提取，需进行水解处理。酸水解 ( 简便、快速，但专一性差)酶水解(β-葡萄糖醛酸苷酶、硫酸酯酶)有机破坏：有些生物样本需通过有机破坏的方法使被测游离。干法破坏（如高温电阻炉灰化，氧瓶燃烧）湿法破坏游离药物分离：平衡透析法 （半透膜） 超滤法 （超滤管） 超速离心法提取净化 ：液-液萃取 和 液-固萃取液-液提取 (liquid-liquid extraction, LLE) ，选用与水不相混溶的有机溶剂进行提取。溶剂提取的关键问题是：提取选择性和提取率的重复性 。提取效率与分配系数及提取溶剂体积有关（生物样本分析中一般只提取1次，提取回收率一般要求50%以上）15.影响提取率的因素（1）水相pH 当pH=pKa 时, 50%药物以非电离形式存在，欲使药物以游离状态存在，则必须调整样本的pH值。 （碱性药物 pH﹥pK a 2~3个单位；酸性药物 pH﹤pK a 2~3个单位）（2）有机溶剂：要求对未电离部分可溶而对已电离部分不溶；沸点低（易挥干）；与水不混溶，无毒；不易燃烧；不易乳化；具有较高的化学稳定性和惰性；不影响紫外检测。（3）离子强度：在水相中加中性盐，如NaCl，可增加离子强度，使溶液中水分子与无机离子强烈缔合，导致与药物缔合的水分子减少，使药物在水相中溶解度变小，有利于有机溶剂提取16.离子对提取法：被测物Q+ 与反离子X－形成离子对 QX，增强了药物的脂溶性，可被有机溶剂提取。 常用反离子：测定碱性药物(阳离子)——采用烷基或芳基的磺酸盐(庚烷磺酸钠等)，无机酸根（ClO4-, Cl- ）；测定磺酸、硫酸、羧酸类药物或葡萄糖醛酸苷（阴离子）——采用4~12个C的烷基铵，如四丁基铵等17.提取技术试管内操作，一般提取一次，至多两次。有机溶剂与