017高效液相色谱法..doc

题目：高效液相色谱法检验操作规程 编码：SOP-LOP-017（00） 份数：03 颁布部门：质保部 分发部门：质保部 生效日期:2004.04.01 起草人： 审核人： 批准人： 起草日期： 审核日期： 批准日期： 分发人： 分发日期： 分发号： 分发范围： 质保部、中心化验室、档案室 1.目的 本规程规定了高效液相色谱法的检测方法和操作要求，通过实施本规程，达到高效液相色谱法检验操作规范化，保证高效液相色谱法检验结果的准确性。 2.范围 适用于本公司药品采用高效液相色谱法的质量检测。 3.职责 QC化验员对本标准的实施负责，质保部负责监督。 4.引用标准　 《中华人民共和国药典》（2000年版一部附录VI D） 5.程序 5.1 定义 高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相，用泵压入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。 5.2 适用范围 高效液相色谱法用于挥发性低，热稳定性差，分子量大的高分子化合物以及离子型化合物等的定性、定量分析。 5.3 仪器 高效液相色谱仪主要由输液泵系统、进样器系统、色谱柱、检测器、记录器、显示器及数据处理机（或兼有组分收集系统）等组成。使用时应 题目：高效液相色谱法检验操作规程 编码：SOP-LOP-017（00） 份数：03 颁布部门：质保部 分发部门：质保部 生效日期:2004.04.01 按仪器的标准操作规程进行操作。 5.4 仪器使用要求 5.4.1 色谱柱的填充剂、流动相的组分应符合各品种项下规定。但因仪器型号、色谱柱牌号不同，分离效果有较大差异。故除固定相种类，流动相组分，检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量以及检测器灵敏度等，均可作适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。 5.4.2 用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法中5.7.1的要求。 5.4.3 除另有规定外，柱温为室温。如果柱效稍低，也可适当提高色谱柱柱温，使柱效有所提高。 5.4.4 进样量一般为数微升。除按各品种项下规定外，也可适当改变。一般色谱图在20min内记录完毕。 5.4.5 流动相及供试品溶液需用滤器过滤后使用或进样。流动相应先脱气处理后使用。 5.4.6 流动相首选甲醇—水系统，如经试用不适合时，再选用其他溶剂，为保护仪器，应尽可能少用含有缓冲液的流动相。如果流动相中含有缓冲剂，每日使用后应用不含缓冲剂的流动相将仪器管路、泵、进样阀、色谱柱及检测池等充分冲洗干净。 5.4.7 洗脱方式：可采用恒定组成溶剂洗脱，梯度洗脱，以提高分离效果，改善峰形，提高灵敏度和缩短色谱时间等。 5.4.8 色谱柱保存时应使填充剂处于湿润状态，两端密塞，可根据仪器说明书要求保存，如十八烷基键合硅胶可在甲醇中保存，硅胶可在己烷中保存等。 题目：高效液相色谱法检验操作规程 编码：SOP-LOP-017（00） 份数：03 颁布部门：质保部 分发部门：质保部 生效日期:2004.04.01 5.5 色谱柱 5.5.1 填充剂 首先填充剂为十八烷基键合硅胶，硅胶及氨基键合硅胶，如经试用不适用时，再选其他填充剂，硅胶色谱柱用于正相色谱，化学健合固定相色谱柱，根据键合基团的不同可用于正相或反相色谱或离子对色谱。如十八烷基键合硅胶，辛基键合硅胶用于反相色谱或离子对色谱，等等。 5.5.2 色谱柱的性能 分析型常用柱：内径2～5mm，长10～30cm。各种色谱柱使用前，按说明书要求的测试条件作色谱柱效检查，求出理论板数（n）及相邻组分的分离度（R≥1.5）均应符合规定。药品检验中大多数采用柱效不很高的柱即可满足要求。如仪器配有较高柱效的色谱柱可妥善保存，供必要时使用，另置一般柱效的色谱柱作日常检验用。 5.6 内标物的选择 5.6.1 内标物应是样品中不含有的组分，否则会使峰重叠，而无法准确测量内标物的峰面积。 5.6.2 内标物的保留时间应与待测成份相近，达到完全分离，分离度R≥1.5。 5.6.3 内标物必须是纯度符合要求的化合物，若非纯品无干扰峰也可以采用，已知含量的较纯物质也可用，但需扣除内标物的重量。 5.7 系统适用性试验 按各品种项下的要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数，分离度、重复性和拖尾因子。 5.7.1 色谱柱的理论板数（n） 在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t（以分钟或长度 题目：