2011细胞工程复习..docVIP

名词解释 细胞工程:以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学步骤，有目的的利用和改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。 愈伤组织：脱分化后的植物细胞经过细胞分裂，产生无组织结构无明显极性的松散的细胞团。 外植体：用于离体培养的植物或组织片段 极性（植物细胞）：植物器官、组织甚至单个细胞在不同的轴向上存在某种形态结构以及生理生化上的梯度差异。不均等分裂是细胞极性建立的标志。 动物细胞培养:是从动物体内取出细胞或组织，模拟体内的生理环境，在无菌，适温和丰富的营养条件下，是离体细胞或组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。 干细胞：是一类具有自我更新和分化潜能的细胞，根据来源可分为胚胎干细胞和成体干细胞。 动物克隆：一种通过核移植过程进行无性繁殖的技术。这种不经过有性生殖过程，而是通过核移植生产遗传结构与细胞核供体相同动物个体的技术，就叫做动物克隆。 前体：指某一代谢中间体的前一阶段的物质。一般在生物合成反应的中间过程中，某一阶段前的物质，都可以说是该阶段物质的前体物质。 细胞融合：是指使用人工方法使2个或2个以上的细胞合并形成1个细胞的技术。 单克隆抗体：经过免疫的哺乳类动物单一的B淋巴细胞，可以合成分泌单一性的抗体，我们称这种具有特异性的、同质性的抗体为单克隆抗体。 组织工程：是利用生命科学、医学、工程学的原理与技术，利用细胞、生物材料、细胞因子实现组织修复或再生的一门技术。 细胞转化：是指细胞发生遗传改变而产生永生化，即由有限细胞系转化为连续细胞系，可以在体外进行无限传代和生长繁殖。 胚胎干细胞：是从着床前胚胎内细胞团或原始生殖细胞经过体外分化抑制培养分离的一种全能性细胞，是可以分化成任何一种组织类型的细胞。 动物细胞大规模培养：是指在生物反应器中高密度大量培养细胞用于生产生物制品的技术。 看护培养：用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖。 微载体：是直径60~250μm的适用于贴壁依赖型细胞生长的微珠。特点：1.好的生物相容性：无毒无害，有好的黏附性，一般带正电荷2.大的比表面积：颗粒均匀，孔径均一3.良好的传质性能4.强的机械性能：重复利用、保护细胞5.好的热稳定性： 获能：是指精子获得穿透卵子透明带能力的过程。 体细胞杂交：是指将不同来源的原生质体相融合并使之分化再生、形成新物种或新品种的技术。 多倍体：指体细胞中含有超过正常染色体组数的个体。 二.简答题. 1.动物细胞大规模培养定义及有哪些培养系统？ 答：动物细胞大规模培养是指在生物反应器中高密度大量培养细胞用于生产生物制品的技术。 培养流程：组织——消化——原代培养——传代培养（细胞系与细胞株）——小规模培养（转瓶等）——大规模培养（生物反应器）——产品 转瓶（管）培养系统：小量培养到大规模培养的过渡阶段。设计不同规格转瓶转管 微载体培养：适用于贴壁依赖型细胞生长 中空纤维生物反应器培养 玻璃珠培养 单克隆抗体的技术流程? 答：1.动物免疫与免疫脾细胞悬液的制备2.骨髓瘤细胞的获得与培养3.细胞融合4 融合细胞的筛选5.克隆化培养6.分泌抗体的融合细胞的筛选7.单克隆抗体的大量生产2、举例说明动物细胞培养在生物制药中的应用。 NaNO3诱导融合：NaNO3对原生质体无损害，但融合效率低，一般小于4%。 2.高pH的高浓度Ca2+离子诱导融合：钙离子中和原生质体膜或细胞膜表明表面电荷，使细胞彼此紧密接触，决定质膜的稳定性和可塑性；高pH能改变质膜的表面电荷，利于细胞融合。 3.PEG诱导：PEG分子具有轻微的负极性，可以与具有正极性基团的水分子、蛋白质、碳水化合物形成氢键，在相邻的原生质体间起到分子桥的作用，使原生质体接触。当PEG分子被洗脱时，膜电荷发生紊乱而重新分配。此时，一种原生质体上带正电的基团可能与另外一个原生质体中带负电的基团相连，导致原生质体融合。 4.高Ca2+和pH诱导PEG结合：优点：基于PEG的诱导融合优点是融合成本低，勿需特殊设备；融合子产生的异核率较高；融合过程不受物种限制。缺点：是融合过程繁琐，PEG可能对细胞有毒害。 三、物理法 电融合诱导法 原理：在直流电脉冲的刺激下，细胞膜或原生质体质膜表面的电荷和氧化还原电位发生改变，使异种细胞或原生质体粘合并发生质膜瞬间破裂，进而连接，直到闭和成完整的膜形成融合体。 缺点：可能会造成不可恢复的细胞损伤。 PS补充：细胞融合关键环节：（1）亲本选择（单细胞或原生质体制备） （2）两原生质体或细胞互相靠近，粘附（3）质膜融合形成细胞桥 （4）胞质渗透（5）细胞核融合（6）融合细胞筛选 5、化学方法诱导细胞融合可以分为哪几类? 答：1、NaNO3诱导融合 2、高pH的高浓度Ca2+离子诱导融合 3、 4、高Ca2+和pH诱导