10生物技术制药第8章课件.pptVIP

第八章 微生物制药 本章主要内容 第一节 微生物药物的产生菌 第二节 微生物药物产生菌的获得 第三节 微生物药物的生物合成 第一节 微生物药物的产生菌 微生物产生的药物以抗生素为主，还有氨基酸、酶类和维生素类等多种药物。自从抗生素应用于临床以来，已报道的抗生素已有一万种左右，每年以百计增加，已应用于临床的抗生素有一百多种，在人类治疗和预防疾病方面作出了巨大的贡献。主要应用于抗炎、抗肿瘤、抗病毒、抗原虫和抗动植物病毒等方面。 抗生素在临床应用中面临的问题 细菌耐药性逐年增加，疗效逐渐下降甚至无效，导致了治疗感染性疾病中的严重问题，通过新抗筛选来解决现在面临的情况。 在筛选过程中要考虑两方面的问题： 一是代谢产物的产生，尽可能发现新抗及产生菌； 二是代谢产物的活性检测要有灵敏的检测方法和手段。 新微生物药物的筛选过程 药物的产生菌 细菌； 放线菌（目前发现的10000种左右的活性物质中有2／3是由放线菌产生的）; 丝状真菌。 细菌，临床应用的由细菌产生的有价值的抗生素并不多，多为多肽类药物。杆菌肽、粘菌素、多粘菌素。 青霉素、头孢菌素、灰黄霉素。 青霉素，β－内酰胺类抗生素，抑制细胞壁的合成，作用于转肽酶和羧肽酶。 灰黄霉素抑制真菌的生长，使细胞停止分裂。 放线菌产生的药物主要是抗菌药，其次是抗肿瘤药 （1）氨基糖苷类抗生素，临床应用较多广谱抗细菌，作用机制是抑制细菌蛋白质的合成。链霉素、卡那霉素、庆大霉素。 （2）四环类抗生素，广谱抗细菌，抑制蛋白质的合成，与30s小亚基结合，抑制氨酰tRNA与核糖体A的结合，阻断肽链延长。四环素、金霉素、土霉素。 （3）大环内酯类抗生素，抗革兰氏阳性细菌，支原体和衣原体。与50s大亚基结合，抑制转肽反应，阻断蛋白质的合成。红霉素、螺旋霉素。 第二节 微生物药物产生菌的获得 一、利用微生物生产药物的优越性 微生物分布广，种类多，易变异，次级代谢产物多样性和新颖性—微生物是具有潜在治疗效用的新结构化合物的无穷源泉。 利用微生物生产药物 采集样品——分离微生物——发酵——活性物质筛选——活性物质的分离纯化和鉴别——临床前药理、临床试验——开发研究 二、微生物的来源 土壤，海洋，河，湖，极端环境和枯树叶，堆肥。 三、土壤微生物的分离 （一）、采集样品 不同来源的土壤中，微生物的种类和数量有很大的差异，含有机氮较多的中性土中，放线菌和细菌较多。 含有机氮较少的酸性土中，真菌较多。 0－40厘米深处土壤中微生物的垂直分布： 真菌，地表0－0.3米；放线菌和细菌，0－1米，80％在0－10厘米。 采样，5厘米以下，未开垦土地为佳，不同地理和生态环境，不同植被或不同质土壤对放线菌的种类，数量影响较大，南方放线菌种类比北方多，适宜季节为春秋季。 （二）、分离 1、样品的处理 温度：40－100度，高温处理，得到不同种类放线菌。 化学试剂：SDS－酵母浸膏，减少细菌55－90％，将风干土壤与碳酸钙26度培养7－9天，再分离，放线菌数量增加100倍。 物理：离心，16000转，离心20分，上清液主要是放线菌的孢子，沉淀为细菌、真菌孢子。 2、分离培养基 高氏一号，查氏培养基，特殊培养基。 3、抑制剂的应用 目的菌是放线菌，培养基中加入抗真菌的试剂，抗细菌的青霉素或链霉素。 4、分离方法 稀释分离法、划线分离法、组织分离法、干土喷射法——喷土机 5、培养条件 酸度，温度，25－30度，7－14天。 6、挑选 单菌落传斜面。 （三）、新微生物药物的筛选 初筛： 合适培养基及条件利于产生次级代谢产物。 培养方式：固体，琼脂块转到活性测定平皿中；液体，发酵液，测抗菌活性。 复筛： 作平行样，多次实验，确证其所产活性物质的能力和稳定性。 （四）、生产菌的改良 1、自然选育：对于退化、产量下降，菌种不纯等现象，常进行自然选育进行纯化。 2、诱变选育：诱变剂有物理和化学两类，物理诱变剂常为紫外线、X射线，激光等；化学诱变剂主要是烷化剂、碱基类似物等。 第三节 微生物药物的生物合成 （一）、微生物的代谢 微生物代谢是指微生物体内的化学反应（包括合成和分解代谢）。 根据微生物在体内代谢过程中产生的代谢产物在机体的不同作用，可分为初级和次级代谢物。 初级代谢物——使营养物转变为机体的结构物质和对机体具有生理活性作用的物质。包括供机体进行生物合成的各种小分子单体，前体和多聚物。如酶、氨基酸等。 次级代谢物——存在于某些生物中（植物和微生物），并在一定的生长期内出现的一类代谢类型，对基本生命活动几乎无作用，产量较低，但他们在抵抗恶劣环境，伪装躲避，消除自身毒素等方面发挥作用.次级产物的合成途径和产物的结构通常是错综复杂、各不相同的，如抗生素、酶抑制剂、免疫调节剂、生长调节剂等。 （二）