第三章 白质组与蛋白质组学课件.pptVIP

第三章 蛋白质组与蛋白质组学 中南大学 罗建新 第三章 蛋白质组与蛋白质组学 第三章 蛋白质组与蛋白质组学 第一节 蛋白质组与蛋白质组学的定义 第一节 蛋白质组与蛋白质组学的定义 蛋白质组 protein + genome proteome 一种基因组所表达的全部蛋白质 一个细胞或一个机体的基因所表达的全部蛋白质 一、蛋白质组与蛋白质组学的定义 蛋白质组学 阐明生物体全部蛋白质的表达模式与功能模式 从整体的角度分析、鉴定细胞内动态变化的蛋白质的组成、结构、性质、表达水平与修饰状态 了解蛋白质之间、蛋白质与大分子之间的相互作用与联系,揭示蛋白质的功能与细胞生命活动的规律 第二节 蛋白质组及其质点的分离与分析 一、 分 离 纯 化 一、分 离 纯 化 目的蛋白质的含量 提取蛋白质的材料 一、分 离 纯 化 机械法 物理法 化学法 根据蛋白质溶解度、分子大小及形状、电离性 质、生物学功能的差异进行： 1.根据溶解度 2.根据分子量 透析和超滤 平衡离心 凝胶过滤层析 3.根据电荷 毛细管电泳 离子交换层析 4.根据蛋白质的亲和能力 亲和层析 （四） 蛋白质分离纯化的条件 缓冲液 盐、金属离子和螯合剂 还原剂 去垢剂 蛋白酶抑制剂 表面效应 蛋白质的环境因素 温度 储存 二、分析鉴定 二、分析鉴定 （一）Western印迹技术 基本操作步骤： 蛋白样品的制备 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白质的电转移 蛋白质与抗体的结合反应 目标蛋白质的显示 （二）二维凝胶电泳（2-DE)技术 目前蛋白质组研究中最有效的分析鉴定技术之一 由两相组成： 第一相：等电聚焦凝胶电泳 (根据蛋白质电荷差异) 第二相：SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 (根据蛋白质分子量差异) 2-DE分析的基本步骤 2-DE获得的蛋白质图谱 通过2-DE得到的蛋白质分离图谱，需要经过摄像或扫描转换为以像素为基础的、具有不同灰度强弱和一定边界方向的斑点电脑信号。 2-DE图像分析软件包操作过程： （四）放射性核素标记亲和标签法 （五）蛋白质芯片技术 原理 样品分子离子化后，根据不同离子间的质量和电荷比值（m/e）的差异确定分子量。 应用 蛋白质的序列分析 研究蛋白质的修饰 （七） 其它方法 Edman降解法测定蛋白质多肽的排列顺序 核磁共振（NMR）、荧光光谱法测定溶液中蛋白质分子的结构 X射线衍射分析法、小角中子衍射法测定晶体蛋白质的分子结构等 第三节　蛋白质相互作用的研究 （一）蛋白质-蛋白质相互作用的形式 1.蛋白质亚基的聚合 2.交叉聚合 3.分子识别 4.分子的自我装配 5.多酶复合体 （二）蛋白质之间的相互作用力 氢键 范德华力 疏水键 离子键 （三）蛋白质相互作用的研究方法 1.酵母双杂交系统 蛋白质亲和层析 亲和印迹 免疫沉淀 交联 酵母双杂交 噬菌体展示 生物传感芯片质谱 蛋白质工程中的定点诱变技术 1.酵母