培养基的制备与灭菌3试题.pptVIP

实验目录 实验一:培养基的制作与灭菌技术(3学时） 实验二:血球计数板检测灵芝孢子粉数量(3学时） 实验三:土壤微生物的分离与计数(稀释平板法) (3学时） 实验四:微生物的纯化,培养与保种技术(3学时） 实验五:微生物菌落形态观察(1学时） 实验六:微生物大小的测定(2学时） 实验七:革兰氏染色(3学时） 实验一培养基的制备与灭菌 一、目的与要求： 1、了解培养基的配制原理，掌握制备培养基的过程。 2、学习高压蒸汽灭菌操作技术。 3、了解干热灭菌操作要点。 二、原理及说明: 培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。一般来说，培养基包括有水份、碳源、氮源、无机盐类以及生长素等五大类营养成份。此外还得有适宜的PH值，一定的渗透压（即浓度）以及氧化还原电位等。 1、培养基的分类 （1）根据培养基原料来源不同：天然培养基、合成培养基、半合成培养基 （2）根据物理性状分为：液体培养基、固体培养基、半固体培养基 （3）根据培养基使用的用途：基础培养基、加富培养基、鉴别培养基、选择培养基 2、培养基的配制 （1）原料称量、溶解：按下列培养基的配方准确称取各成分，在容器中加所需水量的一半，然后依次将各种原料加入水中，用玻棒搅拌使之溶解。 配制固体培养基时，预先将琼脂称好洗净，然后将液体培养基煮沸，再把琼脂放入，继续加热至琼脂完全融化。 （2）调节PH值 用精密的pH试纸测定，并用1%氧化钠或5%盐酸调节到所需的pH值。 （3）过滤和澄清： 趁热用纱布将培养基进行过滤，除去沉渣、颗粒，使之澄清透明。 （4）分装： 过滤后根据不同需要，立即趁热装入试管或三角瓶等容器中，分装如图： 培养基的分装 注意事项： （1）不要使培养基沾在管口，如沾上，需用干净的纱布擦干净。 （2）液体培养基：分装高度以试管的1/4左右为宜。 （3）固体培养基：分装试管，其装量为管高的1/6~1/5灭菌后制成斜面。分装三角瓶容量之一半为宜。 （4）半固体培养基：分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后，垂直待凝成半固体深层琼脂。 （6）做棉塞 装好培养基的试管都要加上棉塞，这样既可过滤空气，避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发，制棉塞的方法多种，形状各异，总原则如下： （1）用脱脂棉制作（脱脂棉花易吸水） （2）松紧适合 （3）塞头不要太大，一般为球状。 （7）包装 试管口或三角瓶口棉塞部分，用牛皮纸扎，以防灭菌时水蒸气打湿棉塞。 （8）灭菌 灭菌是指杀死物品上或环境中的所有微生物。 灭菌方法可分为四种：物理灭菌、机械灭菌、化学灭菌和生物灭菌。 物理灭菌：1、热力灭菌： 2、紫外光灭菌：一般应用于无菌室和接种箱的灭菌。 热力灭菌： 干热灭菌：适用于玻璃仪器，将物品放入烘箱，160~170oC，1~2小时。 火焰灭菌：适用于常用用具，如接种环、镊子等。灭菌方法是放在火焰上直接灼烧。 湿热灭菌：(1)高压蒸汽灭菌：适用于培养基、衣物等的灭菌。 （2）间歇蒸汽灭菌：适用于不耐高温的培养基或无高压蒸汽灭菌锅时。 （3）巴斯德灭菌：适用于牛乳类等不耐高温的物体。 紫外光灭菌：一般应用于无菌室和接种箱的灭菌。 原理与区别 基本原理：即通过不同的加热方法，使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到灭菌的目的,蛋白质的凝固变性与蛋白质中含水量的多少有关，含水量较多者，其凝固所需要的温度低，反之，含水份较少者需要高温才能使蛋白质凝固。因此杀灭芽孢比杀灭营养体所需的温度高。 干热灭菌与湿热灭菌的区别：在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时水蒸汽穿透力强，水蒸汽的导热性也强。而且当蒸汽与被灭菌的物体接触凝为水时，又可放出热量，使被灭菌物体温度迅速增高，从而增加灭菌效力。 高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌锅是一个耐高压又密闭的金属锅。它是利用在密闭条件下产生高压蒸汽来达到灭菌的效果。其温度在100oC以上，有强大的杀菌能力。因此它是一种用途广泛，效率高的灭菌工具。 分类：1、卧式 2、立式 具体操作步骤： （1）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线） （2）摆入上述包装好的待灭菌的培养基，注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。 （3）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋） （4）打开放气阀，打开电源，自开始产生蒸汽后10 min（此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽）关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时（15磅/平方英寸）控制热源维持所需时间（30min）然后停止加热，让其自然冷却。 （5）待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。 注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚