南农细胞生物学8..docVIP

第-t-章细胞骨架 细胞骨架(cytoskeleton)是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。最初，人们认为细胞质中的基质是均质无结构的，但许多重要的生命现象，诸如细胞运动及细胞形态的维持等，难以得到解释。1928年，Klotzoff提出了细胞骨架的原始概念。但以往电镜制样一般采用饿酸或高锰酸钾低温(0～412)固定细胞，骨架大多被破坏。直到1963年，采用戊二醛常温固定方法，在细胞中发现微管后，才逐渐认识到细胞骨架的存在。 继在真核细胞中发现微丝(microfilament)、微管(microtubule)和中间纤维 (intermediatefilament)细胞质骨架体系之后，近年来又发现在真核细胞的细胞核中存在另一骨架体系，即核骨架—核纤层体系。核骨架或核基质(nuclearma- trix，nucleoskeleton，karyoskeleton)、核纤层(nuclearlamina)与中间纤维在结构上相互连接，形成贯穿于细胞核和细胞质的网架体系。 细胞骨架的概念正在不断发展之中，早期的细胞骨架仅指微丝和微管，目前，狭义的细胞骨架指细胞质骨架，包括微丝、微管、中间纤维；广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。细胞骨架的研究是当前细胞生物学中最为活跃的领域之一，近年来发现细胞骨架不仅在维持细胞形态，保持细胞内部结构的有序性中起重要作用，而且与细胞运动、物质运输、能量转换、信息传递、细胞分裂、基因表达、细胞分化等生命活动密切相关。细胞骨架的研究使人们对生命活动的基本单位——细胞的结构和功能有了新的认识。 目前，细胞骨架的研究已从形态观察为主迅速推进到分子水平，骨架蛋白及骨架结合蛋白的分离、纯化、鉴定、测序及结构分析、基因表达调节、骨架纤维的装配动态及功能分析成为细胞骨架研究的重要内容。绿色荧光蛋白的应用，为研究活细胞骨架的结构及其行使功能中的动态变化开辟了一条新的途径。细胞骨架的研究是从分子水平研究亚细胞结构装配及其功能的突出范例。现在已开始将分子行为与细胞行为，分子结构与细胞功能的研究结合起来，研究表明一种或几种生物大分子即能自装配成骨架纤维网络这样一种亚细胞结构，并能参与完成诸如细胞运动、物质运输、细胞分裂等如此复杂的生命活动。细胞骨架的研究为‘‘生物大分子怎样自装配为生命体”这一生物学基本问题提供了一个例证。 细胞质骨架 微丝 微丝(microfilament，MF)，又称肌动蛋白纤维(actm filament)，是指真核细胞中由肌动蛋白(actin)组成，直径为7 nm的骨架纤维。 (一)成分 肌动蛋白是微丝的结构成分，相对分子质量为43X103。肌动蛋白单体外观呈哑铃状，其三维结构见图10—1 A。肌动蛋白存在于所有真核细胞中，肌动蛋白在真核细胞进化过程中高度保守，在哺乳动物和鸟类细胞中至少已分离到 6种肌动蛋白，4种称为?肌动蛋白，分别为横纹肌、心肌、血管平滑肌和肠道平滑肌所特有，另两种为?肌动蛋白和?肌动蛋白，见于所有肌肉细胞和非肌肉细胞胞质中。不同类型肌肉细胞的。肌动蛋白分子一级结构(约400个氨基酸残基)仅相差4～6个氨基酸残基，?肌动蛋白或?肌动蛋白与?横纹肌肌动蛋白相差约25个氨基酸残基。显然这些肌动蛋白基因是从同一个祖先基因进化而来。多数简单的真核生物，如酵母或粘菌，含单个肌动蛋白基因，仅合成一种肌动蛋白，然而，许多多细胞真核生物含有多个肌动蛋白基因，如海胆有11个，网柄菌属(Dictyostelium)有17个，在某些植物中有60个。 图10—1 肌动蛋白三维结构与肌动蛋白纤维 A：肌动蛋白单体三维结构，一分子ATP和C3’’结合T33-~中间核苷结合槽(nucleutide。1pft、．R．Rn2h蛋白纤维由锫昭片!厂．Rn动蛋白纤维仆子樽剥㈠，白Harvev Lodish．1995) ＼扩质量为64X10’，分子长度为40nm，由两条平行的多肽链形成。螺旋构型，原肌球蛋白位于肌动蛋白螺旋沟内，一个Tm分子的长度相当于7个肌动蛋白(图 10—4)。原肌球蛋白结合于细肌丝，调节肌动蛋白与肌球蛋白头部的结合。肌球蛋白I肌球蛋白II肌球蛋白V图10—2 A：几种常见的肌球蛋白分子结构示意图；B：Ⅱ型肌球蛋白经胰蛋白酶水解成杆状轻酶解肌球蛋白(LMM)和重酶解肌球蛋白(HMM)，重酶解肌球蛋白经木瓜蛋白酶水解形成肌球蛋白头部(S1)和杆部(S2)肌球蛋白肌动蛋白图10—3 快速冷冻深度蚀刻电镜技术显示骨骼肌细胞中肌球蛋白 与肌动蛋白间的横桥(引自Heuser) (二)装配 微丝，亦称为纤维形肌动蛋白(F—actin)，是由球形肌动蛋白(G—actin)单体形成的多聚体(图10—1 A，B，C)。肌