考点2：微生物的分离与计数研讨.doc

一、学习目标：说出培养基对微生物的选择作用，并进行微生物的分离和计数。 二、学习导航：自主学习 （一）、分解尿素的细菌的分离与计数 1、分离原理：用__________培养基筛选菌株，即用__________做唯一氮源的培养基。在培养基中加入 指示剂，若指示剂变红，说明该种菌能分解尿素。 2、计数方法：测定微生物数量的常用方法有 和____ 法。 稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 活菌，通过统计平板上的 数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取 值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，这是因为当两个或多个细胞连着一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 （二）、分解纤维素细菌的分离 1、筛选方法： 染色法。 2、原理: 用_ ___做唯一碳源的选择培养基筛选菌种。刚果红是一种染料，它可以与像 这样的多糖物质形成 色复合物，但并不和水解后的纤维二糖 和葡萄糖发生这种反应。当我们在含有 的培养基中加入刚果红时， 能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被 分解后，刚果红－纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的 。这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 合作探究： 1、统计的菌落数往往比活菌的实际数目低 ，这是因为什么？ 2、为提高实验结果的准确性，如何设置对照？ 3、利用了选择培养基筛选纤维素分解菌，为什么还要用刚果红染色法鉴定后分离？ 三、典型例题： 例1：饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，还影响对其他营养物质的利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等。以下是科研人员从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌株的过程示意图。请分析作答。 （1）培养基中除了添加植酸钙以外，应含有 、 、水、无机盐等基本营养物质。 （2）为防止杂菌污染，要对培养基和培养皿等进行　　　　　　　　　，而且须将接种后的培养皿呈　　　　　状态放置。 （3）接种以前进行的一系列操作，目的是在培养皿表面形成 。根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的 就能大致推测出样品中的活菌数。 （4）由于植酸钙的不溶解性，使培养基中形成白色浑浊。产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。实验结果显示A~E五种菌株中， 是产植酸酶的理想菌株。 （5）获得目的菌以后，若要用于植酸酶的生产，还需要进行 。 变式1-1：莠去津是一种含氮的有机化合物，它是广泛使用的除草剂之一。莠去津在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，按下面程序选育能降解莠去津的细菌（目的菌）。已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明。据图回答： （1）由于莠去津的　　　　__　作用，在长期使用莠去津的土壤中可能含有目的菌。 （2）下图是A～C瓶中三类细菌的最大密度柱形图，由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的目是　　　　　　　　　　。 （3）在固体培养基中，无透明菌落利用 的氮源主要是　　　　　　　；有透明带菌落利用的氮源主要是　　________，据此可筛选出目的菌。 （4）要培养和分离这种目的菌，实验室常用的方法是_________________法和_________________法。 四、反馈拓展： 1、从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作不正确的是（ ） A.将土壤用无菌水稀释，制备10-3~10-5土壤稀释液 B.将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上 C.用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌 D.从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株 2、 从土壤中分离能够降解纤维素的微生物，下列说法不正确的（ ） A．可以从纤维素丰富的腐叶土中采集土壤样品 B．利用稀释涂布平板法接种 C．利用纤维素作为唯一氮源的培养基进行筛选 D．利用刚果红染色法，挑选出有透明圈的菌落即为目的菌 3、将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是（ ） A．对比观察培养基有没有被微生物利用 B．对比分析培养基是否被杂菌污染 C．没必