低次烟叶发酵制备烟草萃取液的研究解析.docxVIP

低次烟叶发酵制备烟草薄片萃取液的研究王宜君1汤朝起2严新龙3许赣荣1*（1.江南大学生物工程学院，工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡214122；2.上海烟草集团有限责任公司，上海200082；3.江苏太仓海烟烟草薄片有限公司，江苏苏州 215400）摘要：对低次烟叶分别进行高温高水分好氧和厌氧发酵，烘干醇化一周后制备烟草薄片萃取液，应用顶空固相微萃取气质联用HS-SPME-GC-MS对不同萃取液中的挥发性致香成分进行分析比较，并将萃取液涂布于片基进行评吸。结果表明，经高温高水分好氧和厌氧发酵低次烟叶制备的萃取液中挥发性致香成分种类分别为50种、49种，相对含量分别达60.80%、72.15%。而未经发酵低次烟叶制备的萃取液中挥发性致香成分种类为29种，相对含量为34.84%；低次烟叶经固态发酵后所得萃取液中酸类、酯类、酮类、醇类、醛类、杂环类等致香成分均有不同程度的增加，増香除杂效果明显，能够改善烟草薄片的吸食品质。关键词：低次烟叶；发酵；烟草薄片；香气成分中图分类号：TS 444 文献标志码：A 文章编号：低次烟叶是卷烟生产中质量较差的产品，合理开发利用这些产品用于造纸法再造烟叶，可产生巨大的经济和环境效益[1-2]。已知低次烟叶中含有3000多种化合物，包括糖类、氨基酸、蛋白质、有机酸等以及各种烟草致香物质。对低次烟叶进行综合利用，已成为烟草、化工、香精、医药等行业科研工作者关注的问题。但研究重点集中在如何提取其相应化学成分上，如提取烟碱和茄尼醇，或采用各种萃取技术制备烟用香精香料。而对烟草发酵产香的开发利用也仅限于制备一些烟用浸膏[3]。在造纸法再造烟叶生产工艺中，一般是以烟梗、烟末及碎烟叶等到为原料，通过萃取工艺制取萃取液。这一过程主要是物理加工过程。低次烟叶含有大量的糖类、蛋白质等物质，可被微生物利用；将低次烟叶在一定条件下进行发酵，促进有益微生物在低次烟叶上的生长及发酵，则在发酵过程中，会降解烟叶中的部分化合物，同时产生一定量的代谢产物，因而经过发酵的低次烟叶，萃取后有可能得到品质更优良的萃取液。以固态发酵低次烟叶为原料，制备烟草薄片萃取液[4]，以期提高萃取液的品质、降低烟草薄片的青杂气、刺激性，提高相应烟草本香香味物质种类和含量的研究报道还未曾见过。这正是本课题需要重点研究的内容。利用微生物发酵低次烟叶产香具有原料易得、成本低、可操作性强等优点[5-6]。深入开展低次烟叶的基础及应用研究，开发出适用于中式卷烟的新型烟草比薄片，是造纸法再造烟叶技术研究的重点工作之一[7]。考虑到再造烟叶是以水对烟草原料进行萃取，故本实验以高温、高水分为发酵条件对低次烟叶分别进行好氧和厌氧固态发酵，并以其为原料制备烟草萃取液，采用顶空固相微萃取气质联用方法，分析不同萃取液中的挥发性致香成分，并与未经发酵的低次烟叶制备的萃取液进行对比，以期为低次烟叶发酵在造纸法再造烟叶领域中的应用提供科学依据[8-10]。收稿日期：2015-01-08基金项目：上海烟草集团有限责任公司科技项目（SZBCW201000744）作者简介：王宜君（1989-），男，硕士研究生，研究方向：生物质资源的开发与利用。*通讯作者：许赣荣（1957-），男，江西赣州人，工学博士，教授，研究生导师，主要从事发酵工程与生物化工研究。 Email:grxu123@126.com1材料与方法1.1原料低次烟叶由上海烟草集团有限公司提供，为2012年福建烟叶；浓硫酸、浓盐酸、氢氧化钠、硫酸铜、硫酸钾、3,5-二硝基水杨酸均购自中国国药集团化学有限公司。1.2设备UV3000型-可见光分光光度计日本Hitachi公司；红外智能8孔消化炉 上海沛欧分析仪器有限公司；SKD-200凯氏定氮仪上海沛欧分析仪器有限公司；PYX-XHS-405 型电热恒温培养箱，上海跃进医疗器械厂制造；YHG-300BS型鼓风恒温干燥箱上海康路仪器设备有限公司；气相色谱—串联质谱联用仪 Trace1300/TSQ8000美国Thermo公司。1.3固态发酵方法1.3.1好氧固态发酵低次烟叶条件：取低次烟叶2kg，喷洒一定量的水至水分为50%,装入固态发酵装置铁桶中，置于50℃条件下发酵6d，取出低次烟叶烘干陈化一周后萃取制备烟草萃取液。1.3.2自封袋厌氧发酵条件：取低次烟叶0.5kg，喷洒一定量的水至水分50%，装入自封袋中，排出空气，置于45℃真空培养箱中发酵4d,取出低次烟叶烘干陈化一周后萃取制备烟草萃取液。1.4分析方法1.4.1烟草常规化学成分的测定还原糖、总糖的测定—DNS法。粗蛋白及总氮的测定—凯氏定氮法。烟碱的测定—紫外分光度法。1.4.2致香成分的测定SPME分析条件：取8mL烟草萃取液，置于顶空瓶中，采用75μm CAR/PDMS萃取头，样品预热5min，5