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双水相萃取技术 Aqueous two phase extraction （ATPE） 化学系 应用化学 徐**** 【摘要】介绍了双水体系的概念、双水相萃取的种类、原理，影响分配的因素。分析了双水相的优势双水相的双水相技术技术的结合双高聚物双水相体系其成相机理是由于高聚物分子的空间阻碍作用，相互无法渗透，不能形成均一相，从而具有分离倾向分为二相一般认为只要两聚合物水溶液的憎水程度有所差异，混合时就可发生相分离，且憎水程度相差越大，相分离的倾向也就越大。可形成双水相体系的聚合物有很多，典型的聚合物双水相体系有聚乙二醇（polyethylene glycol，略作PEG)/葡聚糖（dextran），聚丙二醇（polypropylene glycol)/聚乙二醇和甲基纤维素（methylcellulose)/葡聚糖等。聚合物盐双水相体系相其成相机理是相此类双水相体系一般采用聚乙二醇（）作为其中一相成相物质，而盐相则多采用硫酸盐或者磷酸盐。双水相萃取与水-有机相萃取的原理相似，都是依据物质在两相间的选择性分配。当萃取体系的性质不同时，物质进入双水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种力（如憎水键、氢键和离子键等） 的存在和环境因素的影响，使其在上、下相中的浓度不同。分配定律分配情况服从分配定律，即，“在一定温度一定压强下，如果一个物质溶解在两个同时存在的互不相溶的液体里，达到平衡后，该物质在两相中浓度比等于常数”，分离效果由分配系数来表征。物质在双水相体系中分配系数K可用下式表示： 　　K= C上/ C下其中C上和C下分别为被分离物质在上、下相的浓度。 2.3.1成相聚合物的相对分子质量 高聚物的相对分子质量对分配的影响符合下列一般原则: 对于给定的相系统，如果一种高聚物被低相对分子质量的同种高聚物所代替，被萃取的大分子物质，如蛋白质、核酸、细胞粒子等，将有利于在低相对分子质量高聚物一侧分配。 如PEG-Dextran系统中，PEG相对分子质量降低或Dextran相对分子质量增大，蛋白质分配系数将增大。相反，如果PEG相对分子质量增大或Dextran相对分子质量降低，蛋白质分配系数则减小。这一原则适用于不同类型的高聚物相系统，也适用于不同类型的被萃取物质。 2.3.2成相系统的总浓度 当接近临界点时，生物大分子均匀地分配于两相，分配系数接近于1。如成相聚合物的总浓度或聚合物/盐混合物的总浓度增加时，系统远离临界点，系线的长度也增加，此时两相性质的差别也增大，蛋白质趋向于向一侧分配，即分配系数或增大超过1,或减小低于1。增大时,系统远离临界点,系线长度增加,成相物质的总浓度越高,系线越长,蛋白质越容易分配于其中的某一相。 2.3.3盐类的影响 由于各相应保持电中性，因而在两相间形成电位差，这对带电生物大分子，如蛋白质和核酸等的分配，产生很大影响。加入适当的盐类，会大大促进带相反电荷的两种蛋白质的分离。当盐类浓度很大时(1-~5 mol/L NaCl)，则由于盐析作用，蛋白质易分配于上相。 由于HPO42-离子在PEG-葡聚糖系统中的分配系数很小，因而加入pH大于7的磷酸盐缓冲液能很方便地改变相间电位差，而使带负电荷的蛋白质移向富聚乙二醇的相。 2.3.4 pH值 pH会影响蛋白质中可以解离基团的离解度，因而改变蛋白质所带电荷和分配系数。pH也影响磷酸盐的离解程度，若改变H2PO4-和HPO42-之间的比例，也会使相间电位发生变化，而影响分配系数。 2.3.5 温度 温度的影响是间接的。大规模双水相萃取一般在室温下进行，不需冷却，因为（1） 成相聚合物PEG对蛋白质有稳定作用，常温下蛋白质一般不会发生失活或变性； （2） 常温下溶液粘度较低，容易相分离；（3） 常温操作节省冷却费用。 2.3.6荷电PEG作为成相聚合物 在聚合物上引入电荷可以增大两相间的电位差 相间电位差与电荷数成反比，利用带电PEG能产生较大的相间电位，故能使分配系数增加。 3、双水相的优势　　ATPE作为一种新型的分离技术，对生物物质、天然产物、抗生素等的提取、纯化表现出以下优势： （1）含水量高（70%--90%），在接近生理环境的体系中进行萃取，不会引起生物活性物质失活或变性；　　（2）可以直接从含有菌体的发酵液和培养液中提取所需的蛋白质（或者酶），还能不经过破碎直接提取细胞内酶，省略了破碎或过滤等步骤； 　　（3）分相时间短，自然分相时间一般为5min～15 min； 　　（4）界面张力小（10-7～ 10-4mN/m），有助于两相之间的质量传递，界面与试管壁形成的接触角几乎是直角； 　　（5）不存在有机溶剂残留问