2.土壤中分解尿素的细菌的分离和计答题.ppt

5、怎样证明此培养基具有选择性呢？ 对照实验：指除了被测试的条件以外，其他条件都相同的实验，其作用是比照实验组，排除其他可能因素，证明确实是所测试的条件所引起的相应的结果 三、课题成果评价 1.培养物中是否有杂菌污染及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显多于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落 2.样品的稀释操作是否成功 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功 3. 重复组的结果是否一致 同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。应分析产生差异的原因 * 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2) 脲酶 + CO2 NH3 + H2O 3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 二.研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照 1、自然界中寻找 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多 数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 ㈠.筛选菌株 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 ---------选择培养基 什么是选择培养基？ 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基配方： ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源、能源？ 碳源：葡萄糖 氮源：尿素 能源：葡萄糖 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 4、 培养基选择分解尿素的微生物的原理 ③此培养基对微生物是否具有选择作用？是如何进行选择的？ 5、怎样证明此培养基具有选择性呢？ 以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基 ?是 分离分解尿素的细菌 判断实验组培养基有无选择性 实验组 对照组 培养基类型 是否 接种 ?目的 ?结果 只生长能分解尿素的细菌 生长多种微生物 是 方法1、显微镜直接计数： 利用特定细菌计数板或者血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 ㈡.统计菌落数目： 方法2、通过滤膜法来测定:(测定饮用水中 大肠杆菌的数目） 将已知体积的水过滤后， 将滤膜放到伊红美兰培养基上培养，大肠杆菌 的菌落呈黑色，可以根据培养基上黑色菌落的 数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。 方法3.间接计数法（活菌计数法） ⑴常用方法：稀释涂布平板法。 ⑵原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长着一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。（菌落数与活菌数的关系） 每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 分析课本P22:两位同学统计结果，回答书上问题 启示： a．在设计实验时，一定要设置重复组，增强实验的说服力与准确性。 b．在分析实验结果时，一定要考虑重复组的结果是否一致，结果相差太大，意味着操作有误，需要重新试验。 目的 实例 原因：⑴土样不同， ⑵培养基污染或操作失误 (或者是混入了其他的含氮物质) ㈢.设置对照：（课本） 小结：