基因工程基本讲义..docVIP

基因工程基本讲义工具酶 DNA重组技术中对核酸的“精雕细刻”主要用酶作为工具。分子生物学研究过程中发现的酶，许多都用作工具。限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）在重组DNA技术中有重要地位，在此较详细介绍。DNA重组技术中最常用的工具酶限制性核酸内切酶 识别DNA特定序列，切断DNA链 DNA聚合酶Ⅰ 或其大片段（Klenow）①缺口平移制作标记DNA探针 ②合成cDNA的第二链③填补双链DNA3’凹端④DNA序列分析 耐热DNA聚合酶（Taq DNA聚合酶等） 聚合酶链反应（PCR） DNA连接酶 连接两个DNA分子或片段 多核苷酸激酶 催化多核苷酸5’羟基末端磷酸化，制备末端标记探针 末端转移酶 在3’末端加入同质多聚物尾 SI核酸酶，绿豆核酸酶 降解单链DNA或RNA，使双链DNA突出端变为平端 DNA端酶Ⅰ 降解DNA，在双链DNA上产生随机切口 RNA酶A 降解除RNA 磷酸酶 切除核酸末端磷酸基 核酸酶核酸外切酶（exonuclease）：是从核酸的一端开始，一个接一个把核苷酸水解下来；核酸内切酶(endonuclease)：是从核酸链中间水解3’，5’磷酸二酯键，将核酸链切断。限制性核酸内切酶的命名用属名的头一个字母和种名的头两个字母，组成3个字母的略语表示寄主菌的物种名称，如大肠杆菌（Es