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PCR技术的发展前景及特点摘要：PCR技术是遗传与分子生物学分析的根本性基石，近年来．基于常规PCR技术开发出了许多新的用途。本文主要阐述PCR技术的发展扩展及特点。关键词：PCR技术引言PCR即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。现已被广泛应用于农学、植物病理学等领域的研究。最初的PCR技术相当不成熟,但在随后的几十年里，PCR技术被不断改进。它从一种定性的分析方法发展到定量测定；从原先只能扩增几个kb的基因到目前已能扩增长达几十个kb的DNA片断到目前为止，PCR技术已有十几种之多。本文对其近年来的主要扩展及应用进行综述。1 .PCR技术的扩展1.1 AP-PCR技术1.1.1 AP-PCR技术的定义、来源及特点AP-PCR技术，是指在对所扩增基因顺序一无所知的情况下，主观上随意地设计或选择一个非特异引物进行PCR扩增，反应在不严格条件下扩增至数轮后，再于严格条件下进行。通过比较扩增产物的指纹图，即可反映出待分析基因组的特征。AP-PCR技术由Williams等于20世纪90年代建立，它可以快速地从两个或更多的个体组织细胞中分离出差异基因或基因差异表达产物，具有简单、灵敏、有效和重复性好等特点。1.1.2 AP-PCR技术的应用AP-PCR技术是常规PCR技术在差异基因分离方面的扩展，主要应用在：(1)差异基因的分离；(2)菌株鉴定；(3)遗传作图。1.2 LP-PCR和彩色PCR1.2.1 LP-PCR和彩色PCR的定义LP—PCR：即标记PCR，它是指利用同位素、荧光素等对PCR引物5’端进行标记，通过PCR反应扩增，来检测目的基因存在与否。彩色PCR是指利用荧光染料标记引物的5’端，不同荧光荧光染料TAMRA呈红色荧光，JOE和FAM呈绿色荧光,COUM呈蓝色荧光)标记的引物同时参加反应,经PCR反应扩增后，根据不同荧光的色泽来判断目标基因是否存在及扩增基因的类型。1.2.2 LP-PCR和彩色PCR的比较LP-PCR与彩色PCR由荧光PCR那发展而来，彩色PCR是LP-PCR的一种。与常规PCR相比，LP-PCR更为直观,其省去了限制性内切酶酶解及分子杂交等繁琐步骤，并且一次可以同时分析多种基因成分，但是LP-PCR只能对产物进行定性鉴定。与LP-PCR相比，彩色PCR通常需要2种不同颜色的引物：一种作为基因检测引物；另一种作为控制条件的内对照。但是在检测多点突变时，彩色PCR需用更多的色彩。1.2.3 LP-PCR和彩色PCR的应用LP-PCR和彩色PCR是常规PCR技术与标记技术相结合的产物，LP-PCR常被用于大量临床标本的基因诊断，同时可用于对PCR产物进行定性鉴定。彩色PCR常被用予检测基因的突变，染色体重排或转位，基因缺失及微生物的型别鉴定等，如被用于检测多突变点的遗传病。1.3免疫PCR技术1.3.1免疫PCR技术的定义、来源及特点免疫PCR是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术，它综合了同相免疫反应和PCR的特点。免疫PCR技术是1992年Sano建立的一种检测微量抗原的高灵敏度技术。与常规PCR及普通ELSA相比，免疫PCR优势明显，具体表现为：灵敏度增加，可以同时进行多种抗原/半抗原检测，有更宽的线性范围。1.3.2免疫PCR技术的应用免疫PCR技术是常规PCR技术在医学免疫学领域的主要扩展。它常被用于：(1)激素和细胞因子的检测；(2)生化酶类的检测；(3)致病微生物的检测；(4)寄生虫感染的检测；(5)其他毒素或蛋白的检测。1.4原位PCR技术与原位反转录PCR技术1.4.1原位PCR技术与原位反转录PCR技术的定义原位PCR技术将PCR高效扩增与原位杂交的细胞定位相结合，在组织细胞水平。原位榆测单拷贝的特定DNA或RNA序列。原位反转录PCR技术，简称原位RT—PCR．它是指先将细胞和组织进行处理(网定、酶消化)，以获得适度的细胞通透性；再通过逆转录使mRNA转录成cDNA；然后把载玻片放人热循环机，对靶DNA等细胞内靶目标在原位进行PCR扩增(扩增反应中含有标记的单核苷酸)；最后通过检测标记产物的方法检测扩增产物。1.4.2原位PCR技术与原位反转录PCR技术的比较原位PCR技术在进一步提高以单细胞底物进行PGD的效率的前提下，由Thornhill提出，它具有细胞定位能力和高度特异敏感。原位反转录PCR技术是原位PCR技术的一种，它检测的靶序列为RNA。具有操作简单、流程短、省时等优点；同时具有特异性差、容易出现非特异性DNA产物、造成假阳性、且扩增效率较低．特别是石蜡切片等缺点。1.4.3原位PCR技术与原位反转录PCR