实验一至三__芦丁提取纯化及分析2014-修正终版..docVIP

实验名称 指导教师 实验1 芦丁的提取及水解制备槲皮素 周延 实验2 高效液相色谱法芦丁及槲皮素标准曲线的测定 周延 实验3 芦丁的大孔吸附树脂纯化 梁浩 7月14日 7月15日 7月16日 7月17日 7月18日 上午 第一批（实验一） 9：00，西304 第三批（实验二-1） 8：00，西211 第二批（实验一） 9：00，西304 第一批（实验二-1） 8：00，西211 第三批（实验一） 9：00，西304 第三批（实验二-2） 8：00，西211 第四批（实验一） 9：00，西304 第四批（实验二-2） 9：00，西211 下午 第一批（实验三） 12：00，西304 第二批（实验三） 12：00，西304 第四批（实验二-1） 14：00，西211 第三批（实验三） 12：00，西304 第二批（实验二-1） 14：00，西211 第四批（实验三） 12：00，西304 第二批（实验二-2） 14：00，西211 第一批（实验二-2） 14：00，西211 制药1101 制药1102 制药1103 药实1101分别为第1，2，3，4批 3-4人一组，每批9组 （4个班学委自己协调分批，如有事，可与其他班同学调换。数据汇总到药1学委处，下周五7月4日前药1学委把每批的名单发我）以小组为单位进行实验。 实验二分为2部分，实验二-1为标准曲线制作，实验二-2为样品测定。两次实验必须使用同一台色谱仪，否则实验结果无效。 每组带洗净的250ml空饮料瓶1个。 工艺实验教师起辅助作用，同学根据参考资料自己完成实验。提前预习关键点，设计实验记录表格，会检查预习笔记。实验1的条件为建议条件，可根据查阅文献，进行条件修改（报告中需说明理由和文献依据）。 实验后原始记录需进行登记，收拾好老师检查后方可离开。 3个实验分别写报告，每个人的三份订在一起。完成实验后一起以班为单位尽早上交。最迟请于7月19日上午9点前交到制药工程办公室科西310。 实验一 芦丁的提取及水解制备槲皮素 实验目的和要求 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 通过测定芦丁和槲皮素含量巩固色谱仪使用方法。 二、实验原理 （一）概述 芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。芦丁有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。芦丁在酸性条件下可水解得到槲皮素。 利用芦丁易溶于碱性水，难溶于酸性水，可用碱性水提取，再调至酸性，黄酮苷（芦丁）即可沉淀析出。提取过程中为了防止芦丁氧化可加入焦亚硫酸钠抗氧化，并加入硼砂保护邻二酚羟基不被破坏。得到粗芦丁后利用其可溶于热水、难溶于冷水的性质重结晶进行精制。 三、仪器和试剂 1实验设备与仪器 烧瓶，温度计，布氏漏斗，抽滤瓶，循环真空泵，恒温加热及磁力搅拌装置，试管，量筒，烧杯，干燥箱，冷凝管，HPLC 2实验材料与试剂 槐花米，硼砂，焦亚硫酸钠，氧化钙，无水乙醇，甲醇，硫酸，盐酸，精确pH试纸， 四、实验内容 1 芦丁的提取 （1）将80g槐米，500mL（pH8-9）澄清石灰水，1.2g硼砂，2.4g焦亚硫酸钠一起置于1000mL圆底烧瓶中，65℃搅拌提取55min，注意添加蒸馏水及烧瓶中颜色的变化（深棕黄色），趁热过滤。 （2）滤下的槐米再次加入400mL澄清石灰水，0.9g硼砂和1.8g焦亚硫酸钠，65℃搅拌提取50min，趁热过滤。 （3）合并两次滤液，用浓HCl调pH至4，置于冰箱中。 2 芦丁的精制 （1）粗芦丁沉淀过滤后干燥，取2g加入400mL蒸馏水，煮沸至芦丁全部溶解，趁热过滤，滤液置冰箱中冷却即可析出结晶，抽滤得芦丁精制品。 3 芦丁的水解（选做） 取精制后的芦丁1g，研碎后于250mL烧瓶中，加2%硫酸溶液80mL，小火回流60min。开始加热10min为澄清溶液，逐渐析出黄色针状结晶，即槲皮素，抽滤并用蒸馏水快速洗涤晶体。 4