药理学教学践报告——测药物对绿脓杆菌的敏感性.doc

兽医药理学教学实践开题报告 琼脂扩散纸法测定药物对绿脓杆菌的敏感性、MIC、MBC测定 二○一一年九月 琼脂扩散纸法测定药物对绿脓杆菌的 敏感性、MIC、MBC测定 （四川农业大学动医09级7班） 【实验背景及意义】 绿脓杆菌或称铜绿色假单胞菌，是一种致病力较低但抗药性强的杆菌。广泛存在于自然界，是伤口感染较常见的一种细菌。能引起化脓性病变。感染后因脓汁和渗出液等病料呈绿色，故名。绿脓杆菌属假单胞菌属，广泛分布于自然界及正常人皮肤、肠道和呼吸道，是临床上较常见的条件致病菌之一。将采集在培养基上生长制备各种抗菌药片进行药敏试验。通过药敏试验来检测这种病原菌对不同药物 【实验原理】 用浸有药物的药敏纸片贴在接种有巴氏杆菌的培养基内，药物会沿着琼脂向周围扩散，药物会影响巴氏杆菌的生长繁殖，因此可抑制其生长的药物可致纸片周围出现一圈不生长细菌的区域，称为抑菌圈，表示此药物对巴氏杆菌的生长繁殖具有抑制作用。通过测定抑菌圈的直径大小可以判定药物的抑菌强弱，抑菌圈直径越大表示药物抑菌作用就越强，抑菌圈直径越小表示药物抑菌作用就越弱，没有抑菌圈表示该药物没有抑菌作用。将抗菌药物梯度稀释、制备成培养基，用琼脂法和液体法测定MIC。将液体发中无细菌生长的各菌液接种于无抗生素的琼脂培养基上，可测定该药物的MBC。 【材料】 药品及细菌——氟苯尼考、氧氟沙星、土霉素、替米考星、林可霉素、泰乐菌素、新霉素、多西环素、磺胺间甲氧嘧啶、甲砜霉素 商品名 药名 生产厂家 注射用头孢噻肟钠 头孢噻肟钠 哈药集团制药总厂 先锋速康 盐酸环丙沙星可溶粉 四川莱邦药业有限公司 雏鸭金方（2号袋） 乳酸诺氟沙星可溶粉 四川莱邦药业有限公司 严迪 替米考星 广东大华农动物保健品有限公司 秦可肥 磷酸泰乐菌素 西安亨通光华制药有限公司 昌和雏痢宁 硫酸新霉素可溶粉 广州粤丰动物保健有限公司 喘痢康 盐酸土霉素可溶粉 广东大华农动物保健品有限公司 福来可 氟苯尼考 广东养空生物制药有限公司 菌虫净 磺胺间甲氧嘧啶钠可溶粉 广东大华农动物保健品有限公司 阿莫欣 阿莫西林可溶粉 广东大华农动物保健品有限公司 （最开始用药，后有更换） 器材——药敏纸片、试管、移液器、烘箱、培养皿、镊子、打孔器、无菌操作台、酒精灯、高压锅、接种环、恒温培养箱 【实验方法及内容】 Ⅰ、药物敏感性测定 一、药敏纸片法 药敏纸片的制备 药敏纸片制备和烘干 取质量好的滤纸，用打孔器打成直径6mm的圆片，每20片放入一个小广口瓶中，干热灭菌（160℃，2h），或湿热灭菌（121℃，15min），在60℃下烘干。 药物稀释 根据药物说明进行药物配比，如规格为100g装的抗菌药物，包装说明兑水400斤，即用天平称取药物1g加入50ml蒸馏水置于灭菌平皿内，充分溶解后吸取1ml，置于另一个灭菌的容器中再加入39ml蒸馏水（50×40）。 纸片浸泡、干燥 取配好的药物溶液放入盛有纸片的小瓶内（药物的多少一浸透纸片为宜），浸泡24h后将多余的药液倒掉，在无菌条件下晾干或在37℃的烘箱内烘干，而后加盖至4~8℃的冰箱中保存备用。 细菌的转种、活化培养 用无菌拭子将细菌接种到MH培养基中，保证细菌均匀的涂布在培养基中。 注意无菌操作。 将培养基置于37℃的恒温箱中培养24h。 接种、贴药敏纸片 （1）将上一步活化培养成功的细菌接种于培养基中，用无菌的镊子轻轻夹取药敏纸片贴在平板表面，注意将纸片铺平，与琼脂充分接触，已经贴下机遇不可再揭起，纸片与纸片的距离应不少于24mm,纸片中心距离边缘不少于15mm，15min内应贴完所有纸片。 （2）将培养基置于37℃的恒温箱中，培养24h。 结果判断 纸片法药物敏感性判断标准 抑菌圈直径（mm） 敏感度 20mm及以上 极敏 15~20mm 高敏 10~14mm 中敏 10mm以下 低敏