细胞生物学实验一讲述.ppt

制作： 顾清 ----------2014级生命生科学院生物科学基地班 学号:0141124726 * 几种光学显微镜的使用 制作： ----------2014级生命生科学院生物科学基地班 学号: 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 目录 1. 实验目的 2. 3. 4. 实验步骤 实验仪器 实验原理 一、实验目的 1.了解 光学显微镜的结构，工 作原理，掌握操作方法。 2.学会使用显微镜提高分辨率。 二、实验原理 （一、）一般光学显微镜的组成为： 1.物镜 2.目镜 3.聚光器 4.光源 （二、）光学显微镜放大原理图 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 相差显微镜 荧光显微镜 暗视野显微镜 普通光学显微镜 （三、）几种光学显微镜 1、普通光学显微镜 也称复式显微镜，最大分辨率一般为0.2微米，可以直接单细胞生物或体外培养细胞，如要观察生物组织样品，则需要对所观察材料进行固定、包埋、切片和染色一系列的处理。 2.暗视野显微镜 也叫超显微镜。暗视野显微镜的基本原理是丁达尔效应暗视野显微镜的聚光镜中央有挡光片，使照明光线不直接进人物镜,无物体时，视野暗黑，不可能观察到任何物体；当有物体时，以物体衍射回的光与散射光等在暗的背景中明亮可见。因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4~200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。。 3.相差显微镜 用于观察未染色标本的显微镜。活细胞和未染色的生物标本，因细胞各部细微结构的折射率和厚度的不同，光波通过时，波长和振幅并不发生变化，仅相位发生变化（振幅差），这种振幅差人眼无法观察。而相差显微镜通过改变这种相位差，并利用光的衍射和干涉现象，把相差变为振幅差来观察活细胞和未染色的标本。 相差显微镜和普通显微镜的区别是：用环状光阑代替可变光阑，用带相板的物镜代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。 是以紫外线为光源， 用以照射标本中的自然荧光物质，使之发出荧光，加以镜检。或以荧光染料先对标本进行染色， 然后使之在上述光源下产生次生荧光，再加以镜检。这种显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 4.荧光显微镜 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 2.放大率 4.视场宽度 能力包括 3.焦点深渡 1.分辨率 （四、)如何提高分辨力 显微镜的能力是质量和性能的标志。其中最重要的是分辨率。 1.数片孔径（N.A.） 也叫镜口率。数值孔径是物镜和聚光镜的主要技术参数，是判断两者性能高低的重要标志。其数值的大小，分别标在物镜和聚光镜的外壳上。是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率(h)和孔径角(u)[物镜所接受的光锥顶角]半数的正玄之乘积。用公式表示如下： NA=hsinu/2 它与分辨率成正比，与放大率成正比，与焦深成反比。 2.分辨率 显微镜可分辨的两点间的最小距离，即为显微镜的分辨率，它主要取决于照明波长以及物镜的球差系数。公式如下： R=0.61×λ/N.A. R:分辨率；λ：照射光线波长；N.A.:物镜数值孔径 物镜的分辨率即显微镜的分辨率，目镜只起放大作用，与分辨率无关。 放大倍数是指眼睛看到像的大小与对应标本大小的比值。它指的是长度的比值而不是面积的比值。例：放大倍数为100×，指的是长度是1μm的标本，放大后像的长度是100μm，要是以面积计算，则放大了10，000倍。 显微镜的总放大倍数等于物镜和目镜放大倍数的乘积。 显微镜的总放大率并非越大越好，，适宜的放大率是所用物镜数值孔径的500~1000倍。 3.放大率 4.焦点深度 显微镜观测物体时，对某一点或面的上下一定的距离范围内是清晰的。这段距离被叫做焦点深度，简称焦深。 显微镜的焦深与物镜的数值孔径和总放大率有关。与物镜的数值孔径和总放大率成反比 三、实验用品 （一、）材料：草履虫、洋