l常用血脂与心功能生化指标的检测.docVIP

常用血脂与心功能生化指标的检测 前言 随着科学技术的迅猛发展，不断产生新的检测技术与相应的仪器，尤其是自动生化分析仪的使用和分子生物学技术的发展，使临床生物化学分析的质和量获得了精确的保证，标志着临床生物化学检验技术已迈进了崭新的发展阶段。目前，血脂和心肌酶的生化检验在相关疾病的临床诊断中具有不可替代的作用。 ? n??????? 血脂生化检测 1 甘油三酯（GPO-PAP法） 1.1 临床意义 甘油三酯属于脂类，它是从食物中吸收和由碳水化合物内源性产生而获得。测定甘油三酯对于诊断和处理高脂血症有着重要的意义。 甘油三酯升高见于：冠心病、冠状动脉硬化、心肌梗塞；原发性高脂血症、肥胖症；糖尿病、肾病综合症、急性胰腺炎、胆道梗阻、甲状腺功能低下、酒精中毒。 甘油三酯降低见于：严重营养不良、脂肪消化吸收障碍、甲状腺亢进等。 ? 1.2 测定原理 样本中的甘油三酯在脂蛋白酯酶的催化作用下发生水解反应，水解反应生成的甘油与试剂中的ATP在甘油激酶的催化作用下反应生成甘油-3-磷酸，甘油-3-磷酸在甘油-3-磷酸氧化酶的催化作用下生成过氧化氢，生成的过氧化氢参与Trinder’s反应，生成醌亚胺色素。该色素在规定波长处有特异吸收，且该色素的生成量与样本中的甘油三酯含量成正比例关系。通过测定样本与标准品经上述反应生成色素的吸光度进行比较，可以计算样本中甘油三酯的浓度。 ? 甘油三酯＋H2?LPL ?甘油＋脂肪酸 甘油＋ATP GYK ??甘油-3-磷酸＋ADP 甘油-3-磷酸＋O2 ???羟磷酸＋+H2O2 G3O?? H2O2＋显色剂＋4-AA?POD ?醌亚胺色素＋H2O 注：LPL、GYK、G3O、POD分别为脂蛋白酯酶、甘油激酶、甘油-3-磷酸氧化酶和过氧化物酶。 ? 干粉试剂使用DHBS作为显色剂，采用520 nm波长比色测试；液体双试剂使用2，4-二氯酚为显色剂，用500 nm波长比色测试；液体单一试剂使用TOOS为显色剂，采用540 nm波长比色测试。 2 血清总胆固醇（CHOD-PAP法） 2.1 临床意义 检测血清中总胆固醇（TC或CHOL）的含量，主要用于辅助诊断高脂血症，胆固醇的含量和动脉粥样硬化有一定的关联。 总胆固醇增高见于：家族性高TC症（低密度脂蛋白受体缺乏），家族性载脂蛋白b缺乏症、混合性高脂蛋白血症。肾病结合征、甲状腺功能减退，妊娠，糖尿病等。 总胆固醇降低见于：家族性无β或低β脂蛋白血症。甲状腺功能亢进，营养不良，慢性消耗性疾病。 2.2 测定原理 TC测定方法种类繁多，化学方法大都用有机溶剂提取血清中的TC，用特殊试剂显色，然后比色测定。主要显色反应有Liebermann－Burchard（L-B）反应及高铁－硫酸反应等两类。这些方法须用腐蚀性的浓酸试剂，特异性差，干扰因素多，准确测定有赖于从血清中提取胆固醇，并对抽提液进行纯化。因此操作步骤多，不适于常规应用。美国疾病控制中心脂类测定标准化实验室所审定的ALBK法，由于抽提液中基本上不存在L-B反应的干扰物，结果准确，为目前国际上通用的参考方法。此法虽然不很复杂，但也不易准确掌握。现在还有少数实验室应用L－B试剂直接显色法、邻苯二甲醛法等，准确性差，已在淘汰之列。 在常规工作中现在普遍应用酶法（CHOD-PAP法）。此法特异，灵敏，精密，用单一试剂直接测定，既便于手工操作，也适用於。自动分析仪测大批标本；既可作终点法，也可作速率法测定。酶法都采用胆固醇酯酶（CEH）水解胆固醇酯(CE)，同时以胆固醇氧化酶（CHOD）将胆固醇氧化成胆甾烯酮并产生H202。终点物的测定则有几种不同的方法。目前普遍应用依赖于H202的显色系统，即Trinder指示反应，试剂包括过氧化物酶（POD）、4—氨基安替比林（4—AAP）和酚（三者简称PAP）。H202与4-氨基安替比林和DHBS反应生成醌亚胺。醌亚胺在520nm有特异吸收，反应产生的颜色与总胆固醇含量成正比。 ①胆固醇酯 LPL 胆固醇＋脂肪酸 ? ? ? ②胆固醇＋O2 CO 胆甾-4-烯-3-酮＋H2O2 ? ? ? ??③H2O2＋4-氨基安替比林＋4-氯酚 POD 醌亚胺色素＋2H2O ? ? ? ? ? ? 注： CO为胆固醇氧化酶 总胆固醇（TC）测定要求做到标准化，与国际标准取得统一。化学测定的胆固醇标准液应以美国NIST（原NBS）的SRM911b为准，其纯度为99.8±0.1％。国内应制出相应的胆固醇纯品。酶法中常用定值血清作标准，规定用参考方法（ALBK法）定值，定值时须用相当于SRM91Jb的胆固醇纯品配制标准溶液。 3 高密度脂蛋白胆固醇（遮蔽法） 3.1 临床意义 ?? ??高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）被认为是一种抗动脉粥样硬化的脂蛋白，防止