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生化试剂的基本知识一、生化试剂的分类2(一)按照化学性质分类2(二)按照临床应用分类2二、反应速度特性2(一)终点法试剂2(二)动力学法试剂3三、显色原理4(一)NAD-NADH和NADP-NADPH系统5(二)p-NP和p-NA系统5(三)H2O2偶联的指示系统5(四)抗原抗体反应指示系统5(五)其它显色反应6四、性能评价方法6(一)主要性能指标：6(二)性能评价方法6生化试剂的分类按照化学性质分类酶类：包括ALT,AST,ALP,ACP,r-GT,α-HBDH,LDH,CK,CK-MB,α-AMY,MSO,ADA,ChE等。底物/代谢产物类：包括TG,TC,HDL-C,LDL-C,UA,UREA,Cr,Glu,TP,Alb,T-Bil,TBA,NH4+,CO2等。无机离子类：包括Ca,P,Mg,Cl等。特种蛋白类：包括apoAl,apoB,Lp(a),C3,C4,PFB(B因子)，IgG,IgA,IgM等。按照临床应用分类无机离子：包括Ca，P，Mg，Cl等。肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP，MSO，T-Bil，D-Bil，TBA，TP，Alb等。肾功能：UA，UREA，Cr等。心肌酶谱：CK，CK-MB，LDH，α-HBDH，AST，MSO。糖尿病：GLU等。前列腺疾病：ACP，p-ACP等。胰腺炎：α-AMY。血脂：TC，TG，HDL-C，LDL-C，apoA1，apoB，Lp(a)。痛风：UA。有机磷中毒：ChE。免疫性疾病：C3，C4，PFB(B因子)，IgG，IgA，IgM，Kappa链，Lambda链。反应速度特性按照反应速度，可以分为终点法试剂和动力学试剂。而动力学试剂又可再分为零级动力学法和一级动力学法。终点法试剂终点法，指经过一段时间(一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这是最理想的分析类型。如图（1）。整个反应达到平衡，由于正向反应的平衡常数很大，可认为所有的被测定物已转变为产物，反应液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比。终点法对反应条件(如酶量、pH、温度)小的改变不敏感，只要这种改变不影响在一定时间内反应达到平衡即可，是最理想的反应模型。图（1）属于终点法的试剂主要有：TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，Cr（氧化酶法），NH4+，CO2 ， Ca，P，Mg，Cl ， apoA1，apoB，Lp(a)，C3，C4，PFB(B因子)，IgG，IgA，IgM等。动力学法试剂零级动力学法零级动力学法，指反应过程中反应速度维持不变，达到最大，与底物浓度无关，因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度（△A/min）与被测物的活性或浓度成正比，主要用于酶活性的测定。如图（2）。实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应的进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再维持不变，同样从启动反应到达到最大速度需要一定时间。因此，零级动力学法是针对特定时间而言的，各试剂商对这段时间有严格规定。图（2）属于零级动力学法的试剂主要有：ALT，AST，ALP，ACP，r-GT，α-HBDH，LDH，CK，CK-MB,α-AMY，MSO，ADA，ChE，TBA等。一级动力学法在一定的反应时间内，反应速度与底物浓度的一次方成正比，由于底物在不断的消耗，因此整个反应的速度在不断的减少，表现为吸光度的增加（或降低）速度越来越小，这类反应达到平衡的时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，经过一段延迟时间才能进入稳定反应期，必需在特定时间段内进行监测，各试剂商对这段时间有严格规定。如图（3）。在一固定时间间隔中，底物浓度的变化量正比于底物的初浓度，这是一级反应的同性。该段时间内吸光度的增加或降低与被测物的浓度成正比。图（3）属于一级动力学法的试剂主要有：Cr（苦味酸法），UREA（紫外监测法）显色原理显色系统主要有以下几种：NAD-NADH和NADP-NADPH系统p-NP和p-NA系统H2O2偶联的指示系统抗原抗体反应指示系统其它显色反应NAD-NADH和NADP-NADPH系统NADH和NADPH在340nm有特征性吸收峰，而NAD和NADP在340nm无特征性吸收峰，利用其偶联的脱氢酶(工具酶)反应，根据340nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。作为该指示系统常用的工具酶有LDH、MDH、GLDH和G6PDH目前利用此指示系统进行测定的临床项目有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、α-HBDH 、Glu、UREA、N