食品微生物检验学实验指导2013-03-08题库.doc

食 品 微 生 物 检 验 学 实 验 指 导 2013-3-19 实验 菌落总数测定实验 大肠菌群MPN测定实验 金黄色葡萄球菌检验实验 魏氏梭菌检验 主要内容：1）细菌筛选 （亚硫酸盐－多粘菌素－磺胺嘧啶，SPS琼脂）；2 细菌培养（液体硫乙醇酸盐培养基，FT培养基）；3）动力硝酸盐还原实验；4）暴烈发酵实验；5）卵黄脂酶水解实验。 实验 罐头食品检验 主要内容：1）罐头感观检查；2）pH值测定；3）染色镜检；4）接种培养（庖肉培养，溴甲酚紫葡萄糖肉糖，麦芽浸膏汤）5）平板筛选（锰盐营养琼脂平板，血琼脂平板，卵黄琼脂平板） 实验7 PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌 主要内容： 1) 以鼠伤寒沙门氏菌以SdiA为模板设计引物：(PCR 产物长度：562bp FsdiA: 5′-tgg cag cag agg atg ttt at-3′ RsdiA 5′-tcg atc tcc gat gag gtc tt-3′ 2) 细菌单克隆水悬浮后做模板，做PCR 3) 电泳检测是否扩出条带。 实验8 霉菌检验[目的与要求] 1.通过本试验要求掌握食品的菌落总数测定的方法，菌落计数和报告方式，以及经常食用的各类动物性食品的菌落总数标准。 2.菌落总数是指食品检样经过适当处理，在一定的条件下培养后，所得1g或1mL检样中所含细菌菌落的总数，其也是判定食品被污染程度的标志。 [实验器材及试剂] 温箱、天平、灭菌试管、吸管、灭菌平皿、稀释液、营养琼脂、牛奶等。 [实验内容] （一）检样稀释及培养： 1.以无菌操作，将检样（牛奶）0.5ml放于含有4.5mL灭菌生理盐水试管内，经充分振摇或研磨作成1：10的均匀稀释液。 2.用无菌移液器吸取1：10稀释液0.5ml，注入含有4.5mL灭菌生理盐水的试管中振摇试管混合均匀，作成1：100倍稀释。 3.更换枪头后，再用无菌移液器，按（2）操作10倍递增稀释，如此每递增稀释一次换一只1mL无菌枪头。 4.根据卫生标准要求或对样品污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，用移液器吸取1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作2个平皿。 5.稀释液移入平皿后，应立即将冷至46 ℃左右营养琼脂培养基（可放置46℃ 水浴中保温）注入平皿约15-20 ml，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有lml灭菌稀释液的灭菌平皿内，作空白对照。 6.待琼脂凝固后，翻转平板，置37℃温箱内培养48±2h。 1 选取30-300 CFU 之间，无蔓延生长的、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 （三） 结果与报告 1 菌落总数的计算方法 1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。 1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算： N=∑C/(n1+ 0.1 n2)d （1） 式中： N——样品中菌落数； ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d——稀释因子（第一稀释度）。 示例： 稀释度 1:100（第一稀释度） 1:1000（第二稀释度 菌落数（CFU） 232，244 33，35 N=∑C/(n1+ 0.1 n2)d = (232+244+33+35)/[2+(0.1×2)] ×10-2 = 544/0.022 = 24727 上述数据按2.2数字修约后，表示为25000或2.5×104。 1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 1.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍