微生物的实验室培养参考讲义.pptVIP

课题1 微生物的实验室培养 1.提供营养和条件 2.防止污染 微生物类型 原核生物界 原生生物界 真菌界 病毒界 (细菌、放线菌、蓝藻) (酵母菌霉菌大型真菌) (草履虫变形虫衣藻) (噬菌体、艾滋病毒) 约有10万种 (一)、微生物特点：结构都相当简单,进化地位低，个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构. 一、基础知识： 繁殖快 、 代谢类型多、分布广泛 、数量多 、易变异  一、基础知识： （二）培养基P14 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 （1）按物理状态分：固体培养基、半固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种保存及分离、鉴定菌落、活菌计数、保藏等，液体培养基常用于发酵工业。 1.培养基的类型和用途 点P16 注意：目的明确、营养协调、条件适宜、经济节约。 液体培养基与固体培养基 选择培养基:从微生物群中选择具有特定表型的细胞.使之进行繁殖所用的培养基,称为选择培养基. 加入青霉素的培养基:分离到酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基:分离到金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离到固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基:分离到自养型微生物 如：当大肠杆菌分解乳糖产酸就与伊红和美蓝结合形成黑色菌落，或带有绿色金属光泽。 鉴别培养基： 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同种类的微生物。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染; 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 合成培养基: 天然培养基： （3）按成分分：天然培养基和合成培养基。 2.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、能源等营养要素， 另外还需要满足微生物生长对pH（真菌5.0-6.0，细菌6.5-7.5，放线菌7.5-8.5）、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气等的要求。 营养要素 定义 作用 主要来源 碳源 凡能提供所需碳元素的物质 构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质 无机化合物：CO2、NaHCO3 有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等 氮源 凡能提供所需氮元素的物质 合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物 无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐 有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等 生长因子 生长必不可少的微量有机物 酶和核酸的组成成分 维生素、氨基酸、碱基等 琼脂 葡萄糖 尿素 选择 合成 异养型 1、下列是与微生物培养有关的问题，请回答： 某细菌固体培养基的组成成分是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是＿＿＿＿，碳源是＿＿＿＿，氮源是＿＿＿＿。已知只有能合成脲酶 的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于＿＿＿培养基。按照化学成分分类，该培养基属于＿＿＿培养基。从同化作用类 型上看，用该培养基培养的细菌属于＿＿＿＿。 2.若硝化细菌、圆褐固氮菌、不固氮的蓝藻混合在一起我们配置什么样的培养基即可以将三种微生物分离？ 碳源 氮源 能源 硝化细菌 CO2 氨 氨 圆褐固氮菌 糖类等含碳有机物 N2 有机物 不固氮的蓝藻 CO2 铵盐、硝酸盐 光 （三）无菌技术P15 1.无菌技术 （1）无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 （2）措施：P15 要记忆 （3）旁栏思考：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌. 在生物体的一定部位产生一种特殊的生殖细胞叫孢子。孢子的特点是能直接长成新个体。 （三）无菌