微生物鉴定(杨丽娜)讲义.pptVIP

微生物鉴定 简介 目录 概述 微生物鉴定的启动及流程 微生物检测 微生物的鉴定 启动条件 坏包样品的选择 样品的记录 坏包样品的处理、准备 检测项目 注意事项 1、启动条件 A．坏包产品的包装无明显破损。 B．由微生物污染引起的坏包（酶类及化学因素用不同的查验方式）。 2、坏包样品的选择 4、坏包样品的处理 已开包的坏包（酸包、苦包等）：需快速将坏包产品的内容物移入无菌容器内并及时检测，如不能及时检测，需冷藏保存，2小时内进行检测。 未开包的坏包（胀包等）：使用75%酒精棉对样品外表面擦试消毒后在无横纵封处剪一半圆或三角取样。 5、检测项目 低酸产品：细菌、芽孢、耐热芽孢，必要时检测乳酸菌(pH＜5时)、霉菌、酵母菌； 高酸产品：细菌总数、霉菌、酵母菌的培养。 耐热性试验 需氧及厌氧培养 增殖 6、注意事项 对已开包的酸包要马上转移到无菌瓶中，已防二次污染。 根据坏包性状，如样液粘稠、凝固等情况下也可以只做划线培养。 根据坏包产品的性状适当的选择培养项目。 做微生物培养的同时测定感官、理化指标，注意其变化。 检查包装完整性。 三、微生物检测 1、微生物的接种 2、微生物的分离纯化 3、注意事项 三、微生物检测 1、微生物接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种 方法：划线接种、绕混接种、涂布接种、三点接种、穿刺接种、液体接种、注射接种、活体接种 三、微生物检测 2、微生物的分离纯化 如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（Pure culture）。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化。 方法：倾注平板法、涂布平板法、平板划线法、富集培养法、厌氧法 倾注平板法 平板划线法 倾注平板法 注意事项 1、操作注意事项 2、培养的注意事项 3、培养基的注意事项 注意事项 1、操作的注意事项 ： 人员：更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋，手的消毒。 仪器设备：保证无菌 原料：无菌、空白试验 方法：正确操作 环境：保证无菌、环境监测 注意事项 2、培养的注意事项： 培养箱湿度：培养基平板培养48h后，培养基失重不应超过15%。 培养温度培养时间:以利于微生物生长、观察。 在有平皿破碎的情况时必须马上进行清理消毒，防止污染。 注意事项 3、培养基的注意事项： 培养基的选择：选择合适的培养基，试剂。 配置：称量准确、加热过程中，注意补液、调PH值容器洁净,忌用铁、铜质器皿 灭菌：选合适的灭菌温度和时间（注意排冷空气） 保存：4-8OC冰箱，避光基础培养基，2周生化培养基，1周选择性分离鉴别培养基，最好现配现用。 使用：无菌检查、需透明，无沉淀，制作平板时，45-50OC倾注平板 四、微生物的鉴定 1、菌落形态的鉴定 2、革兰氏染色 菌落形态记录 大小：1mm为露滴状菌落,1-2mm为小菌落,2-4mm为中等小菌落,4-6mm为大菌落,6mm为巨大菌落； 形状：圆形、不规则状，假根状等； 隆起度：扩展，台状、低凸状、乳头状等； 菌落边缘：边缘整齐、锯齿状、毛刷状等； 表面性状：光滑、褶皱、同心环状等； 表面光泽：金属光泽、腊状等； 颜色透明度：透明、半透明、不透明等； 气味、湿润度、颜色等其他 革兰氏染色 1、原理 2、步骤 3、注意事项 革兰氏染色原理 革兰氏染色步骤 初染（结晶紫染色）：所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色 媒染（革兰氏碘液）：媒染与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力 脱色:乙醇脱色 复染：沙黄复染 镜检 革兰氏阳性 革兰氏染色鉴定 革兰氏染色注意事项 图片：接种环接的菌不能太多，防止涂片太厚，不易脱色和观察。 干燥（固定）：要在酒精灯的高处微微加热，使水分蒸发，切勿紧靠火焰或加热时间过长，防止菌体烧焦变形。 固定的目的： 杀死微生物，固定细胞结构； 保证菌体能更牢固粘附在载玻片上，防止标本被水冲洗掉； 改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的原生质易于脱色。 耐热性实验 60、80、100℃加热10min后划线 60℃----近似压缩空气的温度 80℃----某些耐热中温菌植物细胞的生存温度阈值，近似TBA/8/9灭菌室的温度及灭菌器再生部分的温度。 100℃----接近于某些蒸汽屏障的温度。通过中温菌和嗜热菌的芽孢和某些嗜热菌的一些营养细胞耐热。 反接试验 什么是反接试验？ 反接试验的目的？ 感谢各位参与本次沟通 衷心祝愿各位身体健康、工作顺利 祝愿我们的伊利事业蒸蒸日上 谢谢您的宝贵时间！ 阳性菌 阴性菌 革兰氏阴性 坏包 接种（划线、倾注） 染色 杆菌 球菌 革兰氏阳性