12 色谱分离-精.pptVIP

十九 色谱分析概论 19.1 色谱法分类及特点 色谱法的特点 19.2 色谱分离过程及相关术语 分配比 k：质量比，又叫容量因子或容量比 分配比与分配系数的关系 19.3 色谱流出曲线与术语 3. 相对保留值r21 4.色谱流出曲线的数学描述及区域宽度 19.4 色谱基本理论 1 塔板理论 塔板理论的特点和不足 2 速率理论-影响柱效的因素 涡流扩散项 分子扩散项 传质阻力项 3 分离度 分离度的表达式： 影响分离度的因素 19.5 色谱定性、定量方法 二十 气相色谱法 检测系统 检测器性能评价指标 热导检测器TCD 氢火焰离子化检测器 FID 电子捕获检测器 ECD 其他检测器 20.2 固定相 20.3 分离条件的优化 二十一 高效液相色谱法 检测器 21.2 主要分离类型与原理 液液分配色谱 液固吸附色谱 离子色谱 尺寸排斥色谱 亲和色谱 液-液分配色谱 液-固吸附色谱 离子交换色谱 尺寸排斥色谱 亲和色谱 1. 固体固定相 (1) 活性炭 (2) 活性氧化铝 (3) 硅胶 (4) 分子筛 (5) 高分子多孔微球（GDX系列） 固定液 基本要求：热稳定性好、化学稳定性好、粘度和凝固点低 种类繁多 选择的基本原则： “相似相溶”，选择与试样性质相近的固定液 担体 基本要求：化学惰性、多孔性、热稳定性好、有一定机械强度 种类：硅藻土、玻璃担体、氟担体、高分子微球 2. 液体固定相：固定液+担体（载体） 载气及其流速 H = A + B/u + C·u， 最佳流速uopt ＝(B/C)1/2柱温 柱温↓，分离度↑，分析时间↑，综合考虑 复杂，沸程宽的试样，采用程序升温柱长和柱内径 满足分离目的的前提下，尽可能选用较短的柱 载体 粒度影响柱效进样方式和进样量  21.1 HPLC仪器 高压输液系统 进样系统 色谱柱 检测系统 梯度淋洗装置 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa 高压、高速是高效液相色谱的特点之一 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 紫外检测器 荧光检测测器 电化学检测器 示差折光监测器 介电常数监测器 质谱检测器 …… 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配比不同 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。 固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾； 固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液 阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长； 阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH- 应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。 固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)； 原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。 可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离 原理：利用生物