中药何首乌的化学成分研究.docVIP

中药何首乌的化学成分研究 中药何首乌的化学成分研究 中药何首乌为为蓼科Polygonaceae 何首乌属多年生草本植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的块根。该植物多生于山坡石缝中、篱边、林下、山脚或灌木丛中，在我国大部分地区都有出产，主产于河南、湖北、贵州、四川、广东、广西等地。其根细长，先端膨大成肥大不整齐的块根，表面红褐色至暗褐。中药何首乌有生首乌与制首乌之分，是典型生制两用的药材，生首乌能润肠通便、解毒消痈，制首乌则具有补益精血、乌须发、强筋骨、补肝肾的功效[1]。目前，已经从何首乌中分离得到了近百种化合物，主要为蒽醌类成分、二苯乙烯苷类和黄酮类等成分[2-3]。药理研究发现，何首乌具有神经保护、抗衰老、增强免疫力、调节血脂、肝脏保护等作用[4-6]。在研究天然药物活性物质与功能的过程中，作者对何首乌的化学成分进行了分离，鉴定了6个化合物，包括1个新化合物。 　　1 材料 　　MERCURY-400核磁共振仪，Bruker V-600超导核磁共振仪； Q-TOF 型质谱仪；傅里叶变换红外Nicolet700光谱仪；LC-6AD制备型高效液相色谱仪，YMC Pack ODS-A制备色谱柱；柱色谱硅胶和薄层色谱用硅胶GF254为青岛海洋化工厂生产；反相柱色谱填料 GH-ODSB-12S50为日本YMC公司生产；反相C18高效薄层板为德国Merck公司生产；凝胶柱色谱填料Sephadex LH-20 为瑞典GE公司生产；实验室所用试剂均为分析纯。 　　何首乌药材于2016年10月采购于北京同仁堂药店，产地为湖北，经本课题组鉴定为何首乌P. multiflorum生品的块根。 　　提取与分离 　　干燥的何首乌块根粉末以95%乙醇回流提取次，每次L，每次提取时间均为1 h。提取液合并，浓缩后得浸约500 g。将上述浸膏用水混悬后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，回收石油醚、乙酸乙酯和正丁醇，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。将剩余溶液回收至无醇，加水溶解，得水部分。 　　乙酸乙酯部分用正相硅胶柱色谱，氯仿-甲醇系统梯度洗脱，得到14个部分。 其中Ea11经硅胶柱色谱分为2个部分。Fr2经ODS反相柱色谱，以甲醇：水梯度洗脱，分为7个部分。Fr2-2经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇洗脱， 再经ODS反相柱色谱以40% 甲醇-水做洗脱液，得到化合物1，2。 Fr2-3经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇梯度洗脱，分为4个部分。 Fr2-3-1 经ODS反相柱色谱，70%甲醇洗脱，得到化合物5。Fr-3-2经ODS反相柱色谱，以40%甲醇洗脱，分为3个部分。A经HPLC纯化，分离得到化合物3。2B 经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇洗脱后，又经Sephadex LH-20柱色谱，氯仿-甲醇纯化得到化合物4。Fr2-6经硅胶柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯做洗脱液，得到化合物6。 结构鉴定 　　化合物1为白色无定形粉末。HR-ESI-MS显示其准分子离子峰m/[M-H ]-，结合NMR 推测其分子式为C27H26O11。其红外光谱可观察到有羟基、共轭羰基和苯环的特征吸收。1H-NMR中，可观察到以下结构片段的质子信号：2个对位取代苯环[δ：，；，]；1组四取代苯环的间位氢信号[δ：，]；1组反式烯键氢信号[δ：，]；1个六碳糖信号[ δ：.01，，，，，，]，根据糖端基氢的偶合常数，可判断该糖构型为β构型；化合物1水解后经衍生化反应，气相分析结果与D-葡萄糖标准品数据一致，确定该糖为D-葡萄糖。由此可推断该化合物中含有2个对位取代苯环、1个四取代苯环、1个反式双键和1个β-D-葡萄糖，推测该化合物可能为有苯环基团取代的二苯乙烯苷类化合物。13C-NMR及DEPT图谱进一步确定其结构中存在3个苯环[δ：，，，，，；，，，； ，，，]，1个共轭双键[，]，1个羰基片段[]，1个葡萄糖 [，，，，，]。化合物1与2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的NMR数据[7] 接近，区别在于化合物1多了1个苯环、1个羰基和1个羟基的片段。 　　HMBC谱图上，可观察到δH与δC相关，又与 δC的芳香叔碳相关，因此推测羰基与苯环相连，且苯环的对位被氧化。1H-1HCOSY谱图上，δH与、.57相关，说明 δH是H-2″ 信号。又经HMBC发现，δH与 δC相关，据此确定葡萄的″位与羰基相连。综上分析，结合2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O--β-D-葡萄糖苷的NMR 数据[7]，化合物1的结构鉴定为2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O--β-D-葡萄糖苷。其结构见图1，数据见表1。 　　化合物白色无定形粉末，mp 161～16℃，ESI-MS m/z05[M-H]