第九章 分光光度法简介-精.pptVIP

第九章 分光光度法简述 主讲：陈友 第一节 基础知识 一、光的性质 光是一种电磁波。根据波长不同，光学光谱可分为：紫光（10nm-400nm）、可见光区（400nm-760nm）、红外区（760nm-300μm）。 白光为复合光，可分为红、橙、黄、绿、青、蓝、紫七种颜色的光。 若两种适当颜色的单色光按一定强度比例混合后成为一种白光，则这两种单色光称为互补色光。 二、溶液对光的选择性吸收及溶液的呈色 当一束白光通过某溶液时，由于溶液选择性地吸收了可见光域中某波段的光，而使溶液呈不同颜色，与吸收光颜色互补。 例： 硫酸铜水溶液呈蓝色是因为吸收白光中的黄色呈其补色。 高锰酸钾水溶液呈紫色是因为吸收白光中的绿色呈其补色。 溶液的颜色和吸收光颜色的关系 吸收曲线的讨论： 第二节 光度分析法的基本原理 一、光度分析法： 在光谱分析中，依据物质分子对光的选择性吸收的特性而建立起来的分析方法称为光度分析法 主要有 红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围800nm?50?m 。 主要用于有机化合物结构鉴定。 紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200?400 nm（近紫外区）。 可用于结构鉴定和定量分析。 可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范 围400?800nm ，主要用于有色物质的定量分析。 吸光光度法的特点： （1）灵敏度高； （2）准确度高； （3）操作简便、快速； （4）应用广泛。 二、朗伯—比耳定律朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法的理论基础。 朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即 A=lg =εbc 式中：A 为吸光度； ε摩尔吸光系数，单位L/mol.cm，与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关；c为吸光物质浓度，单位mol/L；b为透光液层厚度，单位cm；I0为入射光强度，I为透射光强度。 朗伯—比耳定律公式的物理意义： 当一束平行单色光通过均匀的有色溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。 ε是各种有色物质在一定波下的特征常数，它可衡量显色反应的灵敏度。其值越大，表示该有色物质对此波长光的吸收能力愈强，显色反应愈灵敏。 例1 有一5.00μg·L-1Fe2+溶液，用1,10-二氮菲显色，溶液为深红色，用比色法测定，吸收池厚度为2cm，于波长650nm处测量，得A=0.190，试计算该显色反应的ε。 例2 一粉红色[Co(H2O)6]2+溶液，在1.0cm吸收池中，于波长530nm时测得A=0.20，已知该显色反应的ε=10L·mol-1cm-1，问此配合物的浓度是多少？ 四、吸收定律的应用 1、目视比色法 用眼睛观察来比较溶液颜色深浅以确定物质含量的方法称为目视比色法。 2、光电比色法和光电比色计 光电比色法—用光电比色计测量一系列物质的吸光度，从而绘制标准曲线，再根据被测溶液的吸光度，从标准曲线上求得其浓度和含量。 3、分光光度法和分光光度计 其作用原理和测量方法与光电比色法基本相同，不同的仅仅是获得单色光的方法不同。光电比色法是通过滤光片获得某一段波长范围的光，而分光光度法是借助棱镜或光棚等分光器，并用狭缝分出波长范围很窄的一束近似的单色光。 紫外-可见吸收光谱的应用 摩尔吸光系数ε的物理意义是什么？其大小与哪些因素有关？ε在分析化学中有何意义？ 什么是吸收曲线？什么是标准曲线？它们有何实际意义？ 答：以入射光波长作横坐标，用分光光度计测量每一波长下物质对光的吸光度作纵坐标所绘制的曲线，称为吸收曲线。其作用是：选择入射光波长，在此波长下测量吸光度，则分析的灵敏度最高。因此，吸收曲线是吸光光度法中选择测定波长的重要依据。 在某特定波长下，用分光光度计测量一系列不同浓度的标准溶液的吸光度，然后以浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标所绘制的曲线，称为标准曲线（亦称工作曲线）。它是作为待测物质定量分析的依据。如果在相同条件下测得待测试液的吸光度值，从标准曲线上就可查得待测试液的浓度，这就是标准曲线法。 * * * 琼州学院生物科学与技术学院 2009/11/02 （1）一种吸光物质对不同波长的光吸收程度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax 。 吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。 （2）同一种物质浓度不同，其吸收曲线形状相似λmax不变。 在λmax处，吸光度A正比于浓度C。