有机污染物分析与生物毒性实验的水样采集与前处理..doc

有机污染物分析与生物毒性实验的水样采集与前处理 1．仪器与试剂 试剂 二氯甲烷(Dichloromethane)：农残级（美国Fisher Scientific公司）； 甲醇（Methanol）：HPLC级（美国Fisher Scientific公司）； 正己烷（n-Hexane）：农残级（美国Fisher Scientific公司）。 硅胶（60－200目）：超纯（美国ACROS ORGANICS）； 中性氧化铝（50－200目）：（美国ACROS ORGANICS）； 无水硫酸钠：优级纯。 药匙（硅胶柱净化所用）：以二氯甲烷超声清洗15min两次、正己烷超声清洗15min一次。 硅胶在180±2℃、氧化铝在250±2℃分别活化12 h（activate）；待冷却至室温时，称重后装入大口锥形瓶（250或500ml），加入其重量3％的蒸馏水去活性（deactivate），添加过程中应用滴管逐滴加入，边加边用力振摇以防止结块，并超声振荡30 min；放置过夜，平衡后加入正己烷浸没其表面备用（一般也需放置过夜）。 无水硫酸钠经450℃焙烧12 h后置于密封广口瓶中保存备用。 仪器与耗材 APFF玻璃纤维滤膜（ф142 mm，孔径0.8~1.2 μm，Millipore）：预先在450℃烘烤3 h，称重记录（较脏水样3~5张为一组，干净水样每张皆需称量，为悬浮物收集所需），蒸馏水浸没保存； 相应的滤膜支架与蠕动泵（Millipore）； 固相萃取装置：Supelco VisiprepTM DL十二管防交叉污染固相萃取装置； 固相萃取柱：Waters OASIS? HLB固相萃取柱（6 cc、200 mg）； 旋转蒸发仪：BüCHI Rotavapor R-200 (瑞士)； 无水真空气泵：美国进口，型号：DOA—P104—BN； 高纯氮气及相应氮吹仪。 所用玻璃仪器均以10％的稀硝酸浸泡过夜，再以重铬酸钾洗液润洗浸泡20 min以上，分别用自来水、蒸馏水冲洗干净，在烘箱中110℃烘干； 所用塑料器皿均以10％的稀硝酸浸泡过夜，再分别用自来水、蒸馏水冲洗干净，倒置晾干。 2．样品的采集与过滤 水样采集 采样瓶采用10 l容量的棕色带塞细口玻璃瓶，样品瓶经重铬酸钾洗液润洗浸泡20 min以上，以自来水、蒸馏水洗净后倒置晾干，待用。 污水、地表水每个样品采集30 l，饮用水每个样品采集45 l。样品运回实验室后如不立即处理需4℃下保存；在存放样品时，应尽量注意存放在没有有机气体干扰的区域，以免交叉污染。所采集样品应在2日内过滤完毕，7日内富集完毕。 挥发性有机物采集 采样瓶选用40mL带有聚四氟乙烯密封垫的螺口玻璃瓶，洗净烘干。采样时先用预采集的水样荡洗两三次，再向样品瓶中充样至溢流，以水样充满，顶部不留任何空间，封瓶时水样中不能有气泡，瓶壁有气泡时应轻摇瓶壁将气泡赶出；4℃下保存。 水样过滤 过滤装置：直径为142mm的Millipore微滤系统； 滤膜：APFF玻璃纤维滤膜； 将20 l（污水、地表水）或40 l（饮用水）滤过水样收集于已洗净的带塞棕色玻璃瓶保存，加入5‰体积的甲醇，以抑制微生物的生长，待富集； 剩余5 l滤过水样用于常规水质分析（250 ml，注意pH值、温度需立即测量）、金属分析（250 ml，加入1 ml硝酸酸化）、氮磷分析（500 ml），均收集于其余备用； 悬浮物的收集：将滤过水样的滤膜用铝箔包好，4℃保存。 3．样品的富集 富集 采用500 mg的HLB固相萃取柱用于水样的富集。先安装好真空抽滤装置及固相萃取装置，HLB柱在使用前依次用二氯甲烷、甲醇、蒸馏水各5 ml清洗，加液后保持5 min，开真空泵抽取液体，处理完后小柱处于活化状态。调节好真空度，使水样过柱的流速恒定在5 ml/min。 洗脱 富集完毕后，将水抽干。 首先以5 ml甲醇/水（甲醇%=5%）为清洗剂，浸泡5 min后，抽干30 min以上； 然后以10 ml甲醇/二氯甲烷（1:9，v/v）为淋洗剂分三次（4 ml、3 ml、3 ml）进行第一级洗脱，洗脱组分为中等极性至非极性组分； 再以5 ml正己烷/二氯甲烷（2:1，v/v）为淋洗剂进行第二级洗脱，洗脱组分为非极性组分。 洗脱液均收集于K-D浓缩器中。将同一样品的第一级洗脱液集中于一个250 ml烧瓶中，添加3药匙无水硫酸钠，放置过夜；转移出清液后旋蒸浓缩，过无水硫酸钠小柱（装柱见净化部分），用15ml二氯甲烷淋洗脱水，用柔和高纯氮气（注意氮气流量要小，表面刚好产生漩涡即可，以免组分损失）吹蒸并置换溶剂为正己烷。 第二级洗脱液集中于另一个150 ml烧瓶中，旋蒸浓缩并置换溶剂为正己烷。 将两级组分合并吹氮浓缩，转移至大容量样品管，定容至6 ml。