藻类生物学实验室新生培训手册.docVIP

藻类光生物学实验室新生培训手册 欢迎各位新生来到藻类光生物学实验室，在这里你们将度过你们的研究生生涯。为了使你们尽快融入实验室这个大家庭，为了使你们今后能够更好的进行科学研究，本实验室将对所有来到这里的新生进行为期2周的培训，希望大家能够积极参与，enjoy it！ 【培训内容】 ●了解实验室规章制度及研究生须知 ●掌握基本实验技术 ●培训总结 一 了解实验室规章制度及研究生须知 为了使实验室能够高效、有序的运转，藻类光生物学实验室制定了自己实验室的规章制度，每位在这个实验室学习工作的人员都必须遵守这些规章制度，同时，各位研究生还需要遵守研究生守则，以保证自己能够顺利毕业。 培训方式：抄写并熟知相关规则。 培训时间：入学第一周第一天 二 掌握基本实验技术 为了能够进行科学研究，一些基本实验技术的掌握是必须的，新生将在实验室技术人员的指导下对实验技术进行熟练操作、掌握。以下是藻类光生物学实验室必须掌握的实验技术，新生在进行实际操作前，必须先对实验原理及步骤进行预习。 培训时间：开学第一、二周 1. 海水二氧化碳系统各分量的计算： 气态CO2溶入海水后，一方面服从亨利定律（在一定温度下，气体在液体中的饱和浓度与液面上该气体的平衡分压成正比[CO2]与CO2的平衡分压pCO2之间的线性关系可表示为[CO2](aq)= KH*pCO2，KH是海水中二氧化碳的溶解度系数K1’→ H+ ＋ HCO3-－←K2’→ CO32- ＋ 2H+ K1’= aH+[HCO3-]/[H2CO3] （1） K2’= aH+[CO32-]/[HCO3-] （2） K1’、K’、分别是碳酸的第1、第2表观解离常数HCO3－] +2 [CO32-]=Ac （3） Ac为碳酸盐总碱度,它跟海水总碱度(AT )有如下关系：Ac=AT - 2.206 ×10-5 × Cl‰ × KB’/（KB’ + aH+） = AT – B Cl‰是海水氯度，KB’ 是硼酸的解离常数’、 K2’、 B值都可查表得到，这样通过测定海水的pH 和总碱度，按下列方程计算碳酸盐体系各组分(HCO∑CO2)的浓度和。[HCO3-]=Ac/(1+ 2K2’/aH+) [CO32-]＝Ac×(K2’/aH+)/(1+2K2’/aH+) [CO2*]= (Ac×aH+/K1’ )/(1+ 2 K2’/ aH+) ∑CO2＝[HCO3－] + [CO3－] + [CO2*] =Ac×[(1+K2’/ aH++ aH+/K1’)/(1+ 2 K2’/ aH+) pCO2=[ CO2*]/KH 因为海水中CO2(aq)和H2CO3是无法区分的，所以用CO2*表示两者的总和， 以上各参数计算在软件CO2 SYS 完成 (By：Lewis, E., and D. W. R. Wallace. 1998. Program Developed for CO2 System Calculations. ORNL/CDIAC-105. Carbon Dioxide Information Analysis Center, Oak Ridge National Laboratory, U.S. Department of Energy, Oak Ridge, Tennessee.)。 计算题：当温度是10℃时，pH值为8.3的海水总碱度为2.5×10-3mol/L, 盐度是31‰， 查表得B值为8×10-5mol/L，CO2溶解系数为4.621×10-2mol/L/atm, pK1’和pK2’分别是5.98和9.10，求海水中各种DIC组分的含量。 2 细胞色素的定量 2.1叶绿素a（chla）、叶绿素c（chlc）和类胡萝卜素 【实验原理】 根据chla甲醇提取液在665nm处有最大吸收峰，利用分光光度计法测定chla的含量。 【实验步骤】 1）将藻体置于一定量的甲醇中，放置于4℃的冰箱内过夜处理。 2）1500g离心10min，取上清，用分光光度计测定其在750、665、652的OD值。 3）按照Porra提供的公式, [Chla] (μg/ml)=16.29*（A665－A750）－8.54*（A652－A750），计算其含量。 采用的公式计算含量： (μg/ml)=67.3×A635-14.1×A668 A635和A668代表波长为的吸收值。采用Strickland Parsons的公式计算类胡萝卜素含量： C