新·08吸光光度法1.pptVIP

混合溶液中待测组分吸光度的测量 适用于混合溶液中任一单一组分 混合溶液中 A总=A待测+A共存 也就是 A待测= A总 - A共存 若 A参比 = A共存 =0，则 A待测= A总 I0 It 待测溶液 参比溶液，又称空白溶液：分光光度测量中假定吸光度为0的溶液 参比溶液与吸光度的测定 I0 参比溶液 It 待测溶液 遮挡光路，调透过率（透过光强度）为0 开启光路，放入参比溶液，调透过率为100％，即A参比 =0 取出参比溶液，放入样品溶液，读数得到样品中待测组分的吸光度 挡 光 板 It=0 待测溶液的制备 原始待测溶液(含有Fe2+及其它共存组分) 加入过量显色剂，根据需要加入其它试剂(可能包括缓冲试剂，离子强度调节剂等)，这部分总称为试剂 加入溶剂稀释到适宜体积 Fe2+ + 3phen = [Fe(phen)3] 待测溶液的成分 待测离子Fe2+ [Fe(phen)3] 其它共存组分 过量的phen 其它加入的试剂(可能包括缓冲试剂，离子强度调节剂等) Fe2+ + 3phen = [Fe(phen)3] 如有吸收，可能对吸光度测定产生干扰 如何选择参比溶液 总的原则：使试液的吸光度能准确反映待测组分的吸收（在测定波长处有吸收的部分在参比溶液中应保留） 最好的参比溶液是：试液中去除待测组分，保留其他所有组分的溶液 原始待测溶液 吸收情况 外加试剂 吸收情况 无吸收 无吸收 纯溶剂空白 无吸收 有吸收 试剂空白 有吸收 无吸收 试液空白 有吸收 有吸收 加入掩蔽剂的溶液 参比溶液 选择 吸光度读数范围 用分光光度计直接读取的是透过率，它与吸光度及浓度不成线性关系，读数误差与浓度和吸光度相对误差的关系是特殊的。 浓度相对误差满足要求的吸光度范围：0.2-0.7； 相对误差最小的吸光度位置为0.434 调整吸光度读数的方法： 改变比色皿的厚度； 改变试液的浓度 称样量、稀释倍数等 示差法 计算示例 Fe(phen)32+溶液的e =1.1×104 L·mol-1 ·cm-1, 在lmax处,用2 cm比色皿测得溶液吸光度A=2. 若DT=0.5%, 1)求Dc/c. 2)怎样才能使A=0.2~0.7? 溶液浓度不变,改变比色皿厚度: 选0.5 cm比色皿,则A=0.5. 或比色皿厚度不变,改变溶液浓度: 稀释3~10倍. (称量减少到 m/3 ~ m/10) A=0.7~0.2 计算示例 若上题中比色皿厚度为0.5cm,欲使测量误差最小,溶液的浓度应为多少? 多组分分析（组分间无干扰） 尽量选择合适的测定波长消除相互干扰 多组分分析（组分间有干扰） 吸光光度法 Spectrophotometry 分析化学 孟建新 生命科技学院化学系 吸光光度法 吸光光度法是以物质对光的选择性吸收为基础的分析方法. 别名： 吸收光谱分析Analysis of Absorption spectroscopy 吸光光度分析，吸光度法（分析） 分光光度法（分析）， 常用的吸光光度法包括可见光吸光光度法,紫外吸光光度法，红外吸光光度法 非发光物质的颜色与光吸收的关系 非发光物质的颜色： 白光是各种不同波长的光的复合光； 白光照射在物质上后，某些颜色的光被物质选择性吸收，不能被吸收的光就透过或反射到人眼被感知出不同的颜色。 一般物质的颜色就是物质吸收光的互补光的颜色： 被物质吸收的光和不能被物质吸收的光合起来就是白光，它们互为互补光。 不同颜色光的互补光 电磁波谱与光谱类型 吸光光度法的特点 灵敏度高：检测下限和常用浓度10-5-10-6 mol/L 准确度高：相对误差1％－5％? 简便快速：常无需分离样品，可直接测定 灵活方便：可测物种广泛 廉价易得：仪器成本很低 吸光光度法的这些优异特点使之成为应用最为广泛的一种仪器分析方法 化学分析与仪器分析方法比较 化学分析(Chemical analysis)： 常量组分(1%), Er 0.1%～0.2% 依据化学反应, 使用玻璃仪器 仪器分析(Instrumental analysis)： 微量组分(1%), E