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实验7 植物细胞培养基母液的配制 目的： 了解和掌握植物组织和细胞培养的基本方法及要点 了解植物组织、细胞培养培养基的主要成分 掌握培养基母液中各部分的配制方法 原理： 生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，在一定条件下，都能进行生长和发育。人为提供合适的光、温、水、气、热等环境条件和植物生长所必须的各种营养成分（培养基），可以使离体细胞、组织按照一定的方式生长和分化。 组成植物组织、细胞培养基的成分包含五大类：无机营养物、碳源、维生素、有机附加物和生长调节物质。 电子天平、烧杯、容量瓶、玻璃棒、药勺、称量纸、标签纸、记号笔、试剂瓶、电炉、冰箱。 配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。 实验器具与药品 ： 常用MS培养基配方： 母液种类 成分 用量 (mg/L) 配制母液(10×,1L)用量（mg） 配制母液(200×,500mL)用量（mg） 大量元素 NH4NO3 1650 / KNO3 1900 / KH2PO4 225＊ / MgSO4·7H2O 370 / CaCl2·2H2O 440 / 微量元素 MnSO4·4H2O 22.3 / ZnSO4·7 H2O 8.6 / KI 0.83 / H3BO3 6.2 / Na2MoO4·2 H2O 0.25 / CoCl2·6H2O 0.025 / CuSO4·5 H2O 0.025 / 常用MS培养基配方： 母液种类 成分 用量 (mg/L) 配制母液(200×,500 mL)用量（mg） 配制母液(200×,500mL) 用量（mg） 铁盐 FeSO4.7H2O 27.8 / 乙二胺四乙酸钠 37.3 / 有机附加物 肌醇（环己六醇） 100 / 盐酸硫胺素（维生素B1） 1＊ / 烟酸 0.5 / 甘氨酸 2.0 / 盐酸吡哆醇（维生素B6） 0.5 / ＊为烟草悬浮细胞培养基配方 计算所配制的各母液成分的需要量（称取量） （1）配制大量元素母液1L (10X) （2）配制微量元素母液500 mL (200X) （3）配制铁盐母液 500 mL (200X) （4）配制有机母液500ml (200X) 3. 植物生长物质母液的配制 2,4–D母液（1mg/ml）：准确称量2,4-D 100mg，先用1～3ml 90%乙醇完全溶解后，加蒸馏水定容；也可以加入少量碱（如1mol/L氢氧化钾、氢氧化钠）溶液，使之中和成为钠盐或钾盐，在水中溶解，再加水定容至100ml，即配成浓度为1mg/ml的母液。 6–BA母液：准确称取6–BA 100mg，应先用少量0.5或1M的盐酸或氢氧化钠溶液溶解，然后加蒸馏水定容至100ml，即配成浓度为1mg/ml的母液。 实验方法与步骤： 注意事项 ： （1）在配制大量元素母液时，尽量把Ca2+,SO42-,PO43-等离子错开分别溶解，同时稀释度大一些，避免生产难溶性盐类。 （2）各种母液均应贴上标签，注明配制名称、日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱，以免变质、长霉。 （3）以后在每次配制培养基时，按培养基总量的1/20、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。 （4）蔗糖、琼脂等，可按配方中要求，在配制培养基时随称随用。 实验报告及作业：完成下列表格 药品试剂名称 母液浓度（倍数） 配制1000ml需取用的母液量 配制500ml需取用的母液量 配制200ml需取用的母液量 大量元素(MS1) 微量元素(MS2) 铁盐(Fe-EDTA.Na2) 有机成份 2,4-D 6-BA 蔗糖 琼脂 20 × 200 × 200 × 200 × 1 mg/ml 1 mg/ml / / 50 ml 0.2mg,即 ?l 2 mg,即 ml 30 g 10 g