3.2体外受精和早期胚胎培养导论.ppt

学习目标： 1.简述哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。 2.简述哺乳动物胚胎的早期培养方法。 3.认同体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。 国产奶牛：年均产奶量3000公斤左右 国际良种奶牛：年均产奶量10000公斤左右 引进一头良种成年奶牛需要3万－5万元 牛的生育率低，一头牛一胎只一个，一生只能生育四五次 牛的生育率虽然很低，但是牛的卵母细胞却相当的多，其卵巢中卵母细胞数目要比一生中排卵数多1000倍左右，公牛产生的精子数目就更多了 伟大设想诞生了 试管动物技术过程： 第一步：体外受精 第二步：早期胚胎的培养 第三步：胚胎移植 哺乳动物体内胚胎的形成需要经过哪些过程？ 精子和卵子的发生-----受精-----胚胎的发育 哺乳动物体外胚胎的发育需要完成哪些环节？ 获得精子和卵子----体外受精---体外胚胎培养 1982年世界首例试管牛犊问世 是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育成早期胚胎后，再经移植产生后代的技术。 采集良种母牛的卵母细胞 卵母细胞的体外培养 采集良种公牛精子 精子体外获能 体外受精 良种牛体外受精胚胎 胚胎移植 受体牛 良种犊牛 成熟期牛 屠宰加工厂 市场 采集卵巢中的 卵母细胞 “试管牛”工厂化生产的技术流程图 借腹怀胎 主要包括 、 和 等几个主要步骤 。 概念：采取雌性动物的 和雄性动物的 ，使其在 中受精。 卵细胞 精子 试管 卵细胞的采集 精子的获取 受精 (书P69) 对不同动物,采集卵母细胞的方法不同。 实验动物如小鼠、兔，以及家畜猪、羊等卵细胞的采集： 最常用的方法是卵巢经过 处理，具体做法是给供体注射 ，使一头母畜一次排出比自然情况下多几倍到十几倍的卵子，之后从 中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。 超数排卵 促性腺激素 输卵管 书P69~70 大家畜或大型动物，如牛，卵细胞的采集： 从屠宰场已屠宰母畜的 中采集卵母细胞. 也可以借助 、 或 等工具确定卵泡位置，直接从活体动物中吸取泡卵液（连同卵母细胞）取出，在体外进行人工培养，使其成熟。 卵巢 超声波(B超)探测仪 内窥镜 腹腔镜 牛卵巢 B超活采仪 超声波引导法： 借助超声波探头和屏幕的引导，从活母畜卵巢采集卵母细胞。 操作员先将带有超声波探头和采卵针的采卵器通过阴道插入子宫，同时通过将卵巢贴在探头上。根据B超屏幕所显示的卵泡位置，利用采卵针穿刺卵泡并同时抽吸卵母细胞。 活体采集的牛卵母细胞 CO2培养箱内进行培养 如何使雌性动物排出更多的卵子 促性腺激素处理 对于大家畜或大型动物如何采集卵子 屠宰场、 超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜（活体） 采集的卵子是否马上可以受精 初级(次级）卵母细胞，体外培养至MII中期 收集精子的方法有： 假阴道法 手握法 电刺激法 书P70~71 获能处理: 培养法：啮齿动物、家兔和猪 将取自附睾的精子，放入人工配制的获能液中培养一段时间。 化学法：牛、羊 将精子放在一定浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液中，用化学药物诱导，使精子获能。 在体外受精前，要对精子进行获能处理。通常采用的体外获能方法有 和 两种。 对于 、 和 的精子，一般采用培养法；对于 、 等家畜的精子常用化学法。 培养法：精子在获能液中获能。 化学诱导法：精子一定浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液中，用化学药物诱导获能。 培养法 化学诱导法 啮齿动物 家兔 猪 牛 羊 1、概念：是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。 2、基本原理：人工模拟体内环境（包括营养、温度、pH等），使卵母细胞成熟，同时使精子获能，最终完成受精作用，并有计划地保存胚胎或移植胚胎。 3.受精 在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程 离心的目的是什么？ 卵母细胞的培养的 目的是什么？ 保存剩余的卵子和精子的方法是什么？ 1、目的：精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入 中继续培养，以便检查 和受精卵的 能力。 二、胚胎的早期培养 发育培养液 受精卵 发育 二、胚胎的早期培养 2、培养液成分： 盐类：无机盐和有机盐 营养物质：氨基酸、核苷酸 调节物质：维生素、激素 特有物质：动物血