生物化学综合实验.docVIP

实验目的： 了解评价大米质量的一般简单方法； 掌握分光光度计测吸光值的方法。 实验器材： 1、电饭煲，一次性筷子和纸碗1； 2、250ml烧杯，100ml量筒，玻璃棒；100ml容量瓶；直尺10个（或坐标纸也可以），培养皿，长100mm，内径11.0mm的标准试管（或其它小刻度的标准试管）； 3、水浴锅，分析天平，可见分光光度计，粉碎机； 4、4种大米：湖南籼米、苏北大米、五常香米、东北粳米； 5、NaOH，KOH，碘，碘化钾，冰醋酸，95%乙醇，直链淀粉，支链淀粉，百里酚蓝指示剂。 实验原理： 大米的硬度主要是由蛋白质含量决定的，硬度越强，蛋白质含量越高，透明度越高。反之，蛋白质含量较低的米含水量高，或是用不成熟的稻制的米，透明度差，米的腹部不透明，垩白较大。米最易变为黄色，其主要原因是某些营养成分发生了化学变化。发黄的米，其香味、口感、黏性、营养价值都较差。 淀粉与碘形成碘－淀粉复合物，并具有特殊的颜色反应。支链淀粉与碘生成棕红色复合物,直链淀粉与碘生成深蓝色复合物。在淀粉总量不变的条件下，将这两种淀粉分散液按不同比例混合，在一定的波长和酸度条件下与碘作用，生成由紫红到深蓝的一系列颜色，代表其不同直链淀粉与支链淀粉含量比例，根据吸光度与直链淀粉浓度呈线性关系，可用分光光度计进行测定。 碱消值系指大米在1.7%KOH溶液中30℃浸泡23h，米粒解折程度。碱消值可以代表糊化温度的相对高低。 不同品种的淀粉胶在冷却时具有不同的粘稠性。定量的冷却米胶在水平试管中在一定时间内其延伸的长度不同。通过测量米胶的延伸长度从而确定相应的胶稠度。 盐溶蛋白谱带不同水稻品种之间表现多态性，利用蛋白质电泳技术就可检测出不同不同水稻品种的盐溶蛋白谱带。 实验步骤: （一）、大米外观品质分析 1、看色泽，是否是精白色或淡青色，有无光泽，是不是呈半透明的角质米；2、看形态，颗粒是否整齐、均匀，表面是否光滑，组织是否紧密完整； 3、看碎米粒和杂质是否超标； 4、看有无黄粒米、霉变粒和病斑粒。这些指标虽然重要，但只是大米的外观形态，只有闻才能嗅出大米的品质。 （二）、米饭的蒸煮 1、水洗与浸米 2、加水量 新米加水量一般是米容积的1.1倍，陈米一般是1.2～1.3倍； 3、加热 用电饭煲煮饭； 4、品尝米饭的口感和味道并给出评价。 （三）、稻米直链淀粉含量测定（标准碘比色法） 1、用米粉机将稻米碾成米粉。称取米粉样品2g，置于100mL容量瓶中，加入1.0mL 95%乙醇，轻摇容量瓶，使样品湿润分散，加入9.0mL 1.00mol/L的氢氧化钠溶液，使碱液沿颈壁缓慢流下，旋转容量瓶，使碱液冲洗粘附于瓶壁上的样品。将容量瓶置沸水浴中煮10min后取出，冷却至室温后加蒸馏水定容。吸取5.0mL样品溶液，加入已盛有50mL蒸馏水的100mL容量瓶中，再在这一容量瓶中加入1.0mL 1.00mol/L的乙酸溶液，使样品酸化，加入1.50mL碘液，充分摇匀。用蒸馏水定容，静置20min。以5mL的0.09mol/L的氢氧化钠溶液代替样品，配制空白溶液。用空白溶液于分光光度计波长620nm处调节零点并测出有色样品液的吸光度值 2、称取与待测样品保存在同样的条件下三天以上的高、中、低已知直链淀粉含量的标准样品各0.1000g，用上述改进简化法与待测样品同时进行测定。以标样的直链淀粉为纵坐标，以相对应的吸光度为横坐标，绘制标准曲线或列出曲线的回归方程式： Y=a + b×x （四）糊化温度的测定（碱消法） 1、取6粒成熟饱满的整精米置于培养皿内，加入10.0mL 1.70%氢氧化钾溶液，使米粒浸没，米粒彼此有一定间隔，盖好盖子。 2、将培养皿平稳移至30±2℃的恒温箱内，保温约23h，再平稳地取出。逐粒观察米粒胚乳的分解情况，进行分级记录（以分解度为主）。 （五）、胶稠度的测定 1、称取4种米粉各0.1000g，置于试管内，加入0.20mL百里酚蓝指示剂，并轻轻摇动试管，使样品充分湿润分散。 2、准确加入0.200mol/L氢氧化钾溶液2.0mL，并摇动试管，使米粉充分混合均匀。 3、混匀后立即放入沸水浴内，用保鲜膜盖住试管口，调节水面高度，使沸腾的米胶高度始终维持在试管长度的三分之二左右，糊化时间为8min。 4、取出试管，去除保鲜膜，在室温下冷却5min。将试管在冰水浴中冷却20min。在室温25±2℃下，将试管平放在水平台上。1h后，量出试管底至冷胶前沿的长度，以毫米表示，即为样品的胶稠度。 （六）、大米盐溶蛋白的测定 1、盐溶蛋白提取 单粒研磨, 加盐溶蛋白提取液( 0.05 mo l· L- 1 Tr is-HCl 缓冲液) , 4 ℃提取2 h, 离心( 4 ℃ , 15 000 r·min- 1 , 1