棗庄市新城疫流行病学调查(定稿2).docVIP

枣庄地区鸡群新城疫流行病学调查 张春岭1,2 （1.山东农业大学动物医学院，泰安271018 2.枣庄学院，枣庄 277160） 摘要：采用常规流行病学调查方法，对枣庄市6个地区13个肉鸡群和13个蛋鸡群的ND进行了流行病学调查，结果发现，13个疑似ND肉鸡群的发病日龄一般在7-49日龄之间，发病率、死亡率分别为35%-90%和35%-68%；13个蛋鸡群的发病日龄在70-480日龄之间，发病率、死亡率和产蛋下降率分别在10%-60%、3%-18.7%和10%-50%之间；不同品种的鸡均可发生；肉鸡以冬季多发，蛋鸡以春、秋季多发。通过SPF鸡胚接种和血凝试验（HA）、血凝抑制试验（HI），从26个疑似鸡ND的病鸡群中分离到了20株NDV，其中12株为强毒株，5株为中等毒株，3株弱毒株。用分离的NDV株感染30日龄非免疫鸡，发现发病率为100%，病死率在75%-100%之间，临床症状、病理变化与自然发病鸡相同。并通过流行病学调查，初步探明了枣庄地区鸡场发生ND的原因。 关键词：新城疫；鸡群；流行病学调查；病毒分离 新城疫（Newcastle Disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle Disease Viruse，NDV）引起的鸡的一种烈性传染病，给我国禽业养殖带了巨大的经济损失。近年来，在我国虽然没有大规模暴发ND，但不同地区的局部流行或散发时有发生。在长期高强度的NDV疫苗免疫压力下，ND发病呈现特殊变化，主要是免疫失败现象逐渐增多；感染宿主扩大，对水禽致病力增强；NDV毒力发生了变异，不管人工传代还是自然选择，NDV的毒力均可能由弱变强，并且毒力的演化速度明显在加快[1]。这无疑对传统的ND免疫预防提出了严峻的挑战。本试验采用常规的流行病学调查方法，对枣庄市6区的主要养鸡场的26个鸡群（肉鸡、蛋鸡各半）的ND进行了较系统的调查，基本摸清了该病在枣庄地区的流行状况，并分离获得了20株NDV；该研究结果为枣庄地区养鸡场有效控制ND的发生流行提供了理论依据和技术支撑。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 病料 采自枣庄5区（市中区、薛城区、峄城区、台儿庄区和山亭区）、1市（滕州市）的13个肉鸡群和13个蛋鸡群中患病或死亡的疑似ND病鸡的脑、肝脏、肺脏、血液等样品。 1.1.2 ND标准阳性血清 ND La Sota株标准阳性血清（HI效价为210），本研究室保存；禽流感（H9和H5）单因子标准阳性血清及EDS-76标准阳性血清，均由中国农业大学试验动物研究所病毒室惠赠。 1.1.3 鸡胚与鸡 10日龄SPF鸡胚、1日龄SPF鸡和SPF种蛋，均购自山东省农科院家禽研究所SPF鸡研究中心；6周龄及30日龄非免疫鸡，购自枣庄某鸡场。 1.1.4主要仪器设备 FA1104型电子天平(上海)；二氧化碳培养箱（Forma公司）；CH20生物光学显微镜（Olympus Optical Co. Led. Japan）；SW-CJ-IF净化工作台（江苏苏净集团苏州安泰空气技术公司）；96孔微量V型反应板（艾本德中国有限公司）。 1.2 方法 1.2.1 ND流行病学调查 采用常规流行病学调查方法，对枣庄市6个地区的26个疑似ND的病鸡群的发病日龄、发病季节、发病率、死亡率及产蛋下降率等流行状况进行了调查，记录、处理数据，并对发病原因进行了调查分析。 1.2.2病毒的分离 （1）病料的采集与处理。自枣庄市6个地区26个疑似鸡ND的病鸡群中无菌采集病、死鸡的脑、肝脏、肺脏等样品，每群随机采30只，-20℃保存备用；同时从每群尚无症状或发病不超2 d的鸡中采集10份血样，收集血清4℃保存备用[2]。将上述病鸡的脑、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏等组织剪碎、研磨后冻融3次，加5倍灭菌生理盐水，混匀，加入双抗(青霉素、链霉素)，使其终浓度达到2000 IU/mL，置4℃冰箱中作用2 h，取上清，5000 r/min离心20 min，取上清，用细菌滤器过滤，取过滤液-20℃保存备用。（2）鸡胚接种。取上滤液，尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚10枚，0.2 mL/枚，同时取10枚接种灭菌生理盐水作对照。石蜡封孔，37℃孵育，弃去24 h内死亡的鸡胚，以后每4 h照蛋1次，及时收集死胚，4℃冷却24 h，无菌收集鸡胚尿囊液，作细菌检样后放-20℃保存备用，并观察鸡胚的病理变化。 1.2.3病毒的鉴定 （1）血凝试验（HA）：收集24 h以后死亡鸡胚及96 h内活胚的尿囊液用微量法进行血凝试验，即：先在96孔V型反应板的横排12个孔中各加入50 μL生理盐水，然后取50 μL尿囊液于第一孔中混合，后吸出50 μL至第二孔，依次倍比稀释到第11孔，弃去50 μL，12孔为生理盐水对照孔。然后向每孔加1%鸡的红细胞50 μL，振荡1 min，