手性固定相色谱法在药物研究中的应用.docVIP

手性固定相色谱法在药物研究中的应用 药科学院 李骏 药物化学 2111340003 蛋白质类手性聚合物类环糊精类大环抗生素类Pirkle型冠醚类配体交换型其他Application of Chiral Stationary Phase Chromatography in Pharmaceutical Research Abstract: This article is intended to foresee the outlook for the development of the chiral stationary phase in chromatography by introducing the development of such chiral stationary phases as protein, chiral polymers, cyclodextrin, macrocyclic antibiotics, Pirkle-type, chiral crown ethers, ligand exchange, and others. Keywords: chiral chromatography; the chiral stationary phase; the chiral separation 手性药物在药物中占有很大的比例，据报道，天然或半合成药物几乎都有手性，其中98%以上为光学活性物；全合成药物的40%为手性药物，而且目前常用的700多种药物有一半至少含有一个手性中心，其中90%为外消旋体。[1、2] 利用色谱技术对手性药物进行分离，是新药研究与分析化学中的重要领域。色谱分离药物对映体分为间接法和直接法。[3]而手性固定相法(CSP)属于后者，是直接法的其中一种方式。常用的手性固定相可分为如下大类：(1)蛋白质类手性固定相；(2)手性聚合物类手性固定相；(3)环糊精类手性固定相；(4)大环抗生素类手性固定相；(5)Pirkle型手性固定相；(6)冠醚类手性固定相；(7)配体交换型手性固定相；(8)其他手性固定相。本文综述了近年来手性固定相色谱分离手性药物的方法，以及其研究的新进展。 1 手性固定相手性识别的基本原理 各种不同的手性固定相具有不同的分离模式，从理论上讲，不管选择何种固定相，分离何种对映体，手性分离或手性识别都必须同时有三个相互作用点，这些作用中至少有一个依赖立体化学。该原理1952年首次由Dalgliesh提出，称 三点作用原理，用图1可以说明。 将手性材料固定在硅胶表面，其中含有A、B、C三个作用点，与溶质的一个对映体相应的三个点A、B、C作用，而与另一对映体则无C-C作用力。如果C-C作用力不等于C-D作用力，则该外消旋体就有可能被拆分。三点作用的作用力可以是氢键、偶极作用、范德华力、包合作用以及立体阻碍等。 2 各种手性固定相的最新进展 2.1 蛋白质类手性固定相 蛋白质是一类由手性亚基团(L-氨基酸)组成的高分子聚合物，具有天然的对映体选择性，可识别药物对映体在蛋白质结合位点而达到手性分离，用于拆分对映体的蛋白质的配基有牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HAS)、糖蛋白如α1-酸性糖蛋白、卵粘蛋白和溶菌酶等，其中α1-酸性糖蛋白(AGP)在目前应用较广[4]，该类柱稳定性好，柱效高，对许多药物对映体有良好的立体选择性。此类型固定相可直接分离如氨基酸及其衍生物、酸类、胺类、β-氨基醇类、香豆素类等多种药物对映体等。[5] 不同的蛋白质在手性拆分中的应用中往往表现出手性拆分特异性，即某种蛋白质只对某一类结构的对映体具备拆分效果。例如，纤维素酶型手性固定相只拆分碱性及不带电荷的对映体，人血清键合型手性固定相只对弱酸性和中性对映体具备分离能力。 蛋白质类手性固定相的应用范围较广流动相在绝大多数情况下是含有低浓度的有机溶剂的缓冲液，当蛋白质手性固定相的柱效很好时，与蛋白质的亲和力差别很小的对映体都可得到良好的分离，另外，蛋白质类CSP通过色谱参数的测定可推断蛋白质与药物相互作用的信息[6]，但若使用不当，蛋白质易变质和载样量低是其缺点。 有研究表明[7]，对于人血清键合相手性固定相(HSA)，相比使用甲基丙烯酸甘油脂(GMA)或二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA)作载体，使用硅胶整体柱(silica monoliths)可以获得更好的分离效果。这主要是因为硅胶整体柱，使接触的表面积增加了1.3至2.2倍，从而加大分离效率。另外，Wang等人[8]，通过使用牛血清键合型手性固定相(BSA)，用HPLC在反向模式下，对12种不同的手性物质进行分离，运用热力学方法，阐明BSA的分离机制主要是焓驱动的过程。 2000年至今，很多新的蛋白质键合型手性固定相被开发，应用到液相色谱手性拆分中去