检疫10-生物毒素及生物胺检测描述.pptVIP

水产品中生物毒素及生物胺的检测 海产品卫生检疫 （一）河豚毒素（TTX） 毒素的浓度由高到低依次为： 卵巢、肝脏、肾脏、眼睛和皮肤，肌肉和血液中含量较少。 毒性 河豚毒素属于小分子量、非蛋白质的神经性毒素， 毒性比剧毒的氰化钠还要高1000多倍， 最低0. 5mg即可致人于死命，一般致死剂量为1-4mg。 中毒症状： 发病急剧而剧烈，潜伏期10min-3h， 最初口感觉渴，唇、舌、手指发麻， 继之以末端神经麻木，胃肠道症状，四肢无力，发冷以及口、舌、指端等处麻痹，言语不清、血压、体温下降，呼吸困难， 最后死于呼吸衰竭窒息，其死亡率较高，并没有特别的解药。 一、河豚毒素含量的检测 （一）定量法 《GB/T23217-2008水产品中河豚毒素的测定 液相色谱-荧光检测法》 适用对象：河豚鱼、织纹螺、虾、牡蛎、花蛤、鱿鱼 （二）定性法 1．试样的制备 取样→剪碎、磨碎→取10g放入烧杯→加25 ml 0.1%醋酸→沸水浴10min（不断搅拌）→冷却→减压过滤→残渣用0.1%醋酸溶液反复洗净→滤液和洗液合在一起定容50mL。 该提取液称作原试液 1mL相当于内脏组织0.2g。 （二）定性法 试验动物为：小白鼠 年龄——出生后4周 体重——19~21g 健康状况——健康 种系——ICR系 性别——雄性 (1)预备试验 腹腔注射原试液各1mL，以s为单位测定致死时间的平均值。 根据河豚毒素致死-小白鼠单位换算表换算原试液1mL中的毒量，再以该值配制稀释到小白鼠在10min左右死亡的浓度 （在本试验中使用0.1%醋酸水溶液作为稀释液，记录稀释度。） (2)正式试验 腹腔注射稀释后的试液各1mL，测定致死的时间。 用0.1%醋酸溶液1.0mL注射两只20g左右的小白鼠作阴性对照， 取1只不注射任何液体的正常小白鼠作空白观察。 (2)正式试验 (3)毒力计算和表示 求中间致死时间 在该试验取得的3-5只小白鼠的致死时间也包括生存小白鼠从短时间开始排列，求中间致死时间 (3)毒力计算和表示 求原检样1g的小白鼠单位MU （1MU表示对一只ICR系体重20g的雄性小白鼠腹腔注射后30min内死亡的毒素剂量） 10g内脏组织研磨物制成50mL毒素提取原试液，提取比是5。 原检样1g的毒力（MU/g)＝中间致死时间试液的毒力 x 提取比 x 稀释倍数 二、组胺的检测 二、组胺的检测 当组胺含量积蓄至4mg/g时，人体摄入组胺100mg以上时，易发生中毒。 组胺中毒是由于组胺使毛细血管扩张和支气管收缩所致，中毒症状轻，主要是脸红，胸部以及全身皮肤潮红和眼结膜充血，同时还有头痛、头晕、胸闷等现象。 部分病人出现口、舌、四肢发麻以及恶心、呕吐、腹痛、腹泻、荨麻疹等。有的可出现支气管哮喘、呼吸困难、血压下降。病程大多为1-2天。愈后良好。 有色化合物 480nm 重氮盐的形成： 甲：对硝基苯胺0.5g，加浓盐酸5mL，溶解后，加水至200mL，冰箱储存。 乙：亚硝酸钠0.5g，加水溶解至100mL（现用现配） 二、仪器与试剂 10%三氯乙酸: 25%氢氧化钠 重氮盐试剂： 组胺标准储备液: 准确称取在硫酸干燥器中干燥24h的磷酸组胺27.67mg(分析纯)，用水溶解并定容至100mL容量瓶中。该溶液每毫升含组胺1mg。 组胺标准使用液: 准确吸取组胺标准储备液 l.0mL于500mL容量瓶中，用水定容至刻度，该溶液每毫升含组胺为10ug。 三、试验方法 1、样品处理 除去样品中的非可食部分，将样品捣碎、混匀，准确称取1~5g于50mL具塞三角瓶中，加入20mL三氯醋酸(10%)，在60℃水浴中浸提30min，过滤。 残渣用水洗2次(每次加水10mL )并过滤，合并滤液。用氢氧化钠溶液(250g/L)中和滤液至pH5.0，再用水定容至100mL. 2.抽提： （1）正戊醇抽提： 取滤液1mL于分液漏斗中，加入25％NaOH使其呈碱性。再加入3mL正戊醇，振摇分层提取，然后取正戊醇层。 （2）酸液提取： 取正戊醇液1mL，至于另一个漏斗中，加入3mLHCl（1mol/L），混合均匀，静止5分钟，分层，取下层盐酸溶液。重复提取3次，合并提取液。 3、呈色反应 取1.0-5.0mL盐酸提取液于10ml比色管，加入3mLNa2CO3 (5%)，偶氮试剂3mL，混匀，用水稀释至10mL，混合后放置10分钟，在480nm测光密度。 4、标准曲线的绘制： 取组胺标准使用液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，各加1mL HCl (1mol/L )、3mL Na2CO3 (5%)、偶氮试剂 3mL。同样操作，测定吸光值。确定组胺浓度与吸光值的关系曲线。 计算 * * 对小白鼠的有哪些要求？ 稀释后的