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第二节 分子生物学技术1.标准的PCR过程一般分为变性、退火、延伸三大步,这三大步需要的温度依次是( ) A.94 ℃、55 ℃、72 ℃B.72 ℃、55 ℃、94 ℃C.55 ℃、94 ℃、72 ℃D.80 ℃、55 ℃、72 ℃解析:当温度上升到94 ℃(90~96 ℃)以上时,双链DNA解聚为单链,称之为变性;当温度下降到50 ℃(40~60 ℃)左右时,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合;当温度上升到72 ℃(70~75 ℃)左右时,溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在Taq DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链,称为延伸。答案:A2.DNA的复制需要引物,其主要原因是( )A.可加快DNA的复制速度B.引物可与DNA母链通过碱基互补配对结合C.引物的5端有助于DNA聚合酶延伸DNA链D.DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,只能从3端延伸DNA链解析:DNA的两条链是反向平行的,为了明确地表示DNA的方向,通常将DNA的羟基(—OH)末端称为3端,而磷酸基团的末端称为5端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,而只能从3端延伸DNA链。因此,DNA复制需要引物。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后,DNA聚合酶就能从引物的3端开始延伸DNA链,DNA的合成方向总是从子链的5端向3端延伸。答案:D3.下列有关PCR反应的叙述正确的是( )A.PCR反应所需要的引物只是RNAB.PCR反应所需要的材料是核糖核苷酸C.PCR反应所需要的酶在60 ℃会变性D.PCR反应需要在一定的缓冲溶液中进行解析:PCR反应需要的引物是DNA或RNA,反应所需要的材料是脱氧核苷酸,PCR所需要的酶是耐高温的,在60 ℃不会变性。答案:D4.有关PCR技术,下列叙述不正确的是( )A.用于PCR的引物长度通常为15~40个核苷酸B.在用PCR技术扩增DNA时,DNA的复制过程与细胞内DNA的复制类似C. PCR反应只需一定的缓冲溶液、DNA模板以及四种脱氧核苷酸D. PCR一般经历三十多次循环,每次循环分为变性、复性、延伸解析:PCR反应中需要的条件有模板(DNA分子)、原料(4种脱氧核苷酸)、酶(耐高温Taq DNA聚合酶)、引物(一段DNA或RNA)和一定的缓冲液等。答案:C5.PCR技术扩增DNA,需要的条件是( )①目的基因 ②引物 ③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶等 ⑤mRNA ⑥核糖体A.②③④⑤B.①②③⑥C.①②③④D.①③④⑤解析:PCR技术需要目的基因作为扩增的模板,耐高温DNA聚合酶催化反应的进行,而引物是满足DNA聚合酶起作用的需要,四种脱氧核苷酸是该过程的原料。答案:C6.多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环;94 ℃下使模板DNA变性、解链→55 ℃下退火(引物与DNA模板链结合)→72 ℃下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是( )A.变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键,也可利用解旋酶实现B.复性过程中引物与DNA模板链的结合依靠互补配对原则完成C.延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸D. PCR与细胞内DNA复制相比,所需要酶的最适温度较高解析:变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键,也可利用解旋酶实现;复性过程中引物与DNA模板链的结合依靠互补配对原则完成;延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种脱氧核糖核苷酸;PCR与细胞内DNA复制相比,所需要酶的最适温度较高。答案:C7.下面关于DNA对高温的耐受性的说法,不正确的是( )A.DNA对高温的耐受性一般要比蛋白质强B.超过80 ℃后DNA将变性,即使恢复到常温,生物活性也不能恢复C.不同生物的DNA“变性”温度不一定相同D.深海热泉附近生活的生物的DNA对高温的耐受性更强,其DNA中鸟嘌呤所占的比例更高解析:蛋白质一般不能忍受80 ℃以上的高温,一旦达到此温度,其结构往往会发生不可逆转的破坏,而DNA一般在80 ℃以上情况下才会变性,一旦温度降低,其在高温下解开的两条链又会重新结合成双链,恢复其活性。由于G—C碱基对通过三个氢键相连,所以更稳定。答案:B8.关于PCR的说法不正确的是( )A.PCR是体外复制DNA的技术 B.Taq聚合酶是一种热稳定的DNA聚合酶C.模板DNA只能来源于人工合成D.PCR利用的是DNA双链复制原理解析:模板DNA既可来源于动物、植物、微生物,也可来源于人工合成。答案:C9.PCR操作中,从第二轮循环开始扩增的DNA片段( )A.长度固定B.一端固定C.都不固定D.不能确定解析:PCR扩增产物可分为长产物片段和短产物片段两部分。短产物片段的长度严格地限制在两

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