优质课多聚酶链式反应扩增DNA片段报告.ppt

* 引物 DNA聚合酶 4种脱氧核苷酸 DNA母链 解旋酶 在DNA复制中的作用 参与的组分 胞内DNA复制的基本条件 打开DNA双链 提供DNA复制的模板 合成子链的原料 催化合成DNA子链 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 脱氧核苷酸结构式 O O P O HO 碱基 O OH O O P O HO OH 碱基 3? 碱基 脱氧核糖 磷酸基团 碱基 脱氧核糖 碱基 脱氧核糖 5? 3? 多脱氧核苷酸链结构简图 3? PCR(多聚酶链式反应） 2.DNA聚合酶特性 不能从头开始合成DNA，而只能从DNA的3′端延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物。 3.DNA聚合酶作用过程 当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后， DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。 1.定义： 是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。 PCR原理 ⑴.在80－100°C的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。 ⑵.当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。 ⑶.PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCR仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器。 综上分析可以看出，PCR反应需要一定的缓冲溶液中才能进行，需提供：DNA模板，分别与两条模板母链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行 生物体内DNA复制与PCR反应的区别 体内复制 PCR反应 解旋 在解旋酶作用下，细胞提供能量，部分解开 加热至90 ℃以上时，双链全部解开，不需解旋酶 引物 一小段RNA 可以是RNA或单链DNA分子片段 合成子链 在引物基础上，一条链连续合成，另一条链不连续合成 分别从两条链的引物端开始，都是连续合成，控制温度72 ℃ 特点 边解旋边复制，半保留复制 体外迅速扩增 Taq DNA聚合酶 不需要 需要 循环次数 受生物体自身控制 30多次 相同点 生物体内的DNA复制和PCR体外DNA扩增都需要模板、四种脱氧核苷酸，且都需要在一定的缓冲溶液中进行等 基础自主梳理 一、PCR扩增的原理及条件 1．概念：PCR即_______________，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。它能以极少量的_____为模板，在短时间内复制出上百万份的DNA拷贝。 2．原理 (1)DNA的热变性：在80～100 ℃的温度范围内，DNA_________结构解体，双链分开，这个过程称为_____。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。 多聚酶链式反应 DNA 双螺旋 变性 * * *