王镜岩-生物化学I-第12章核酸通论—第13章核酸的结构选编.ppt

多聚核苷酸的特点 在多聚核苷酸中，两个核苷酸之间形成的磷酸二酯键通常称为3′—5′磷酸二酯键。 多聚核苷酸链一端的C5′带有一个自由磷酸基，称为5′-磷酸端（常用5 ′-P表示）；另一端C3′带有自由的羟基，称为3′-羟基端（常用3 ′-OH表示）。 多聚核苷酸链具有方向性，当表示一个多聚核苷酸链时，必须注明它的方向是5′→3′或是3′→5′。 二、核酸的结构 DNA的分子结构 DNA的一级结构 DNA的二级结构 DNA的三级结构 RNA的分子结构 RNA的一级结构 RNA的高级结构 （一）核酸的一级结构 多聚核苷酸是由四种不同的核苷酸单元按特定的顺序组合而成的线性结构聚合物，因此，它具有一定的核苷酸顺序，即碱基顺序。 核酸的碱基顺序是核酸的一级结构。 DNA的碱基顺序本身就是遗传信息存储的分子形式。生物界物种的多样性即寓于DNA分子中四种核苷酸千变万化的不同排列组合之中。 而mRNA(信息RNA)的碱基顺序，则直接为蛋白质的氨基酸编码，并决定蛋白质的氨基酸顺序。 DNA的一级结构： 5?-AGTCCATG-3? AGTCCATG 3?-TCAGGTAC-5? RNA的一级结构： 5?-AGUCCAUG-3? AGUCCAUG 1.DNA的一级结构 （1）定义：指DNA分子中多个脱氧核苷酸的排列顺序。即数目庞大的四种碱基的排列顺序。 DNA的碱基顺序本身就是遗传信息存储的分子形式。生物界物种的多样性即寓于DNA分子中四种脱氧核苷酸千变万化的不同排列组合之中。 （2）DNA的碱基组成（Chargaff定则）： ①在所有的DNA中，A=T，G=C 即A+G=T+C； ②DNA的碱基组成具有种的特异性，即不同生物物种的DNA具有自己独特的碱基组成(以不对称比率A+T/G+C表示)，但同一生物体内没有组织和器官的特异性。 A=T,G=C这一规律的发现，提示了A与T，G与C之间碱基互补 的可能性。 (3)DNA一级结构的书写方法 文字表示法 文字表示法 线条式表示法 蛇毒磷酸二酯酶是从多核苷酸链的游离3’－羟基端开始、逐个水解下5’—核苷酸。 牛脾磷酸二酯酶则相反，从游离5’—羧基端开始、逐个水解下3’—核苷酸。 由于水解的位置不同，因而所得到的核苷酸可以是3’—核苷酸，或是5—’核苷酸。 核酸外切酶 2.DNA的二级结构 1953年，Watson和Crick 在前人研究工作的基础上，根据DNA结晶的X-衍射图谱和分子模型，提出了著名的DNA双螺旋结构模型，并对模型的生物学意义作出了科学的解释和预测。 (25y) (35y) (1)DNA双螺旋结构的研究背景 碱基组成分析 Chargaff 规则：[A] = [T] [G] = [C] 碱基的理化数据分析 A-T、G-C以氢键配对较合理 DNA纤维的X-线衍射图谱分析 (2)DNA双螺旋结构的特点 ①两条反向平行的多脱氧核苷酸链围绕同一中心轴以右手盘绕成双螺旋结构，螺旋表面 具大沟和小沟。 ②嘌呤碱和嘧啶碱基位于螺旋的内侧，磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧，彼此以3 ′-5 ′磷酸二酯键连接，形成DNA分子的骨架。碱基环平面与螺旋轴垂直，糖基环平面与碱基环平面成90°角。 ③螺旋横截面的直径约为2 nm，每条链相邻两个碱基平面之间的距离为0.34 nm，每10个核苷酸形成一个螺旋，其螺矩（即螺旋旋转一圈）高度为3.4 nm。 2.0 nm 小沟 大沟 ④双螺旋内部的碱基按规则配对，碱基的相互结合具有严格的配对规律，即腺嘌呤（A）与胸腺嘧啶（T）结合，鸟嘌呤（G）与胞嘧啶（C）结合，这种配对关系，称为碱基互补。A和T之间形成两个氢键，G与C之间形成三个氢键。 双螺旋的两条链是互补关系。 每延伸一个核苷酸需四步化学反应： (1) 脱三苯甲基：末端核苷酸的DMTr用三氯乙酸/二氯甲烷溶液脱去，游离出5′-OH 。 (2) 缩合：新生成的5′-OH 在四唑催化下与下一个核苷3′-磷酰亚胺单体缩合使链增长。 (3) 盖帽：有少量(小于0.5%)未缩合的5′-OH 要在甲基咪唑或二甲氨基吡啶催化下用乙酸苷乙酰化封闭，以防进一步缩合造成错误延伸。 (4) 氧化：新增核苷酸链中的磷为三价亚磷，需用碘氧化成五价磷。上述步骤循环一次，核苷酸链向5′方向延伸一个核苷酸。 基本要求 1.掌握核酸的分离、提纯、定