王怀栋上课_基因工程的基本操作程序选编.ppt

1.构建基因表达载体需要哪些工具？ 限制酶、DNA连接酶、运载体。（其中有两种工具酶） 2.为什么要构建基因表达载体？为什么不能将目的基因直接导入受体细胞？ ①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并 且可以遗传给下一代。 ②使目的基因能够表达和发挥作用。 目的基因一定是经过限制酶切割过的基因，那么其结构已经不完整，缺少启动子等调控序列，不可能在受体细胞中表达和发挥作用，会作为异物被分解或派出。 3.作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？ 不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。 4.两种不同生物的DNA能拼接的遗传学理论基础是什么？ ①都以DNA为遗传物质； ②都有四种脱氧核苷酸； ③都具有规则的双螺旋结构； ④都遵循碱基互补配对原则； ⑤共用一套密码子。 三.将目的基因导入受体细胞 （一）转化： （二）方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——Ca2+处理法 （感受态细胞） _________进入受体细胞内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 目的基因 稳定 表达 1、将目的基因导入植物细胞 (1)农杆菌转化法 特点: 能感染双子叶植物和祼子植物,对单子叶植物无感染能力 Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上 转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色体DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 （2）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 （2）基因枪法 （3）花粉管通道法 （3）花粉通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 显微注射技术（最常用，最有效） 2.将目的基因导入动物细胞 方法—— 受体细胞—— 常用受精卵 目的基因的表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵发育 新性状动物 过程： 普通的动物体细胞是没有全能性的，具有全能性的只是其细胞核部分。所以，要得到“转基因动物”受体细胞一定要有全能性，可以选择【受精卵】或【胚胎干细胞】做动物基因工程的受体细胞。 植物体细胞也具有全能性，植物组培技术已比较成熟，所以可以操作其体细胞进行改造。 为什么植物受体细胞可以是体细胞也可以是受精卵而动物细胞只能是受精卵？ 3.将目的基因导入微生物细胞 过程： Ca2+处理受体细胞 感受态细胞 重组表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 思考：早期的基因工程用什么做受体细胞？为什么？ 常用原核生物，因为原核生物繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。 方法—— Ca2+处理法 用Ca2＋处理，增加细菌细胞壁的通透性 思考：为什么要用Ca2+处理受体细胞？ 受体生物 植物 动物 微生物 受体细胞 导入方法 受精卵 体细胞 受精卵 细胞/个体 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注 射技术 用Ca2+处理成感受态细胞 1.为什么要有“目的基因导入受体细胞”这一步？将目的基因导入受体细胞的原理？ 含有目的基因的表达载体只有进入受体细胞，并且维持稳定和表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。原理是：借鉴病毒或细菌侵染细胞的途径。 2. 简述“基因枪法”和“花粉管通道法”。 基因枪法：又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。这是单子叶植物中常用的一种基因转化方法。 花粉管通道法：就是在植物授粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 P12-13 基因工程的基本操作程序及基因工程的应用 聊城三中 王怀栋 2016--2--26 ① 目的基因的获取 ② 基因表达载体的构建（核心） ③ 将目的基因导入受体细胞 ④ 目的基因的检测与鉴定 P8 基因工程基本操作的四个步骤 ① 目的基因的获取 ② 基因表达载体的构建（核心） ③ 将目的基因导入受体细胞 ④ 目的基因的检测与鉴定 P8 基因工程基本操作的四个