生物化學实验报告137030032.docVIP

孝感学院生命科学技术学院实验报告 专业： 学号： 姓名： 分数： 实验二 油脂酸价的测定 一、目的与要求 初步掌握测定油脂酸价的原理和方法；了解测定油脂酸价的意义。 二、实验原理 油脂在空气中暴露过久，部分油脂会被水解产生游离脂肪酸和醛等物质，并且这些物质具有刺激性气味，使油脂产生酸价。酸败的程度使以水解产生的游离脂肪酸的多少为指标的，常以酸价或者是酸值来表示。同一油脂若酸价高，则说明水解产生的游离脂肪酸就多。 酸价是指中和1g油脂中游离脂肪酸所需的氢氧化钾的毫克数。酸价越高，油脂的质量也越差。 三、主要仪器、实验材料和试剂 1. 锥形瓶（250 mL）3个； 2. 量筒（50 mL）1支；3. 碱式滴定管1支；4. 花生油、菜油、芝麻油等；5. 乙醇-乙醚混合液(1:1,V/V)；6. 0.1 ％ KOH（1克KOH溶于1000 mL纯水中）。 四、操作步骤 1. 准确称取1~2 g油脂于250 mL锥形瓶中。 2. 在瓶内加入乙醇－乙醚混合液50 mL，充分振荡，使油脂样品完全溶解成透明溶液。 待油样完全溶解后，加入1％酚酞指示剂3～5滴，立即用0.1％ KOH标准溶液滴定至溶液成微红色（放置30 S内不褪色）为终点，并记录用去的KOH的体积，并按下式进行计算。 酸价＝2(V2-V1)/W V2 ：滴定油样时耗用氢氧化钾溶液的毫升数 V1 ：滴定空白对照耗用氢氧化钾溶液的毫升数 W：油样重(g) 注：滴定过程中如出现混浊或分层，表明由碱液带进水过多，乙醇量不足以使乙醚与碱溶液互溶。一旦出现此现象，可补加乙醇，促使均一相体系的形成。 五、实验结果 油脂名称 起始刻度 终点刻度 体积 （ mL） 酸价 备注 空白对照 六、思考题 请对你的实验结果进行分析。 批阅教师： 年 月 日 孝感学院生命科学技术学院实验报告 专业： 学号： 姓名： 分数： 实验(紫外吸收法 掌握蛋白质的提取方法；学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理；熟练掌握紫外分光光度计的使用方法。 二、实验原理 大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。 由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白质具有吸收紫外光的性质，最大吸收峰在280 nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光密度OD280nm与其浓度呈正比关系，可作定量测定。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1. 试验材料：萌发3天的小麦种子 2. 主要仪器 （1）紫外分光光度计，（2）离心机（3）试管与试管架，（4）刻度吸量管 （5）研钵 （6）100 mL容量瓶 3．试剂：标准牛血清蛋白溶液：准确称取经凯氏定氮法校正的结晶牛血清蛋白，配制成浓度为1mg/ mL（0.5克标准牛血清蛋白纯水定容至500 mL）的溶液。 四、操作步骤 1．蛋白质（淀粉酶）的提取 称取1g萌发3天的小麦种子（芽长约1cm），置于研钵中，加入少量石英砂和2 mL蒸馏水，研磨匀浆。将匀浆倒入离心管中，用6 mL蒸馏水分次将残渣洗入离心管。提取液在室温下放置提取15～20 min，每隔数分钟搅动1次，使其充分提取。然后在3,000 r/min转速下离心10 min，将上清液倒入100 mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为蛋白质原液，用于蛋白质浓度的测定。 2. 标准曲线制作 按表1分别向每支试管内加入各种试剂，混匀。以光程为1 cm的石英比色杯，在280 nm波长处测定各管溶液的光密度值OD280nm。以蛋白质浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘出标准曲线。 批阅教师： 年 月 日 表1 蛋白质标准曲线制作 管号 标准蛋白质溶液（mL） 蒸馏水（mL） 蛋白质浓度（mg/mL） OD280nm 1 0 4 0 ? 2 0.5 3.5 0.125 ? 3 1.0 3.0 0.25 ? 4 1.5 2.5 0.375 ? 5 2.0 2.0 0.50 ? 6 2.5 1.5 0.625 ? 7 3.0 1.0 0.75 ? 8 4.0 0 1.0 ? 3.样品测定 取提取的蛋白质溶液，按上述方法测定280 nm的光密度，并从标准工作曲线上查出提取蛋白质溶液的浓度。若提取蛋白质溶液的浓度大于