生物技術制药总结1.docVIP

第一章 绪论 一、生物技术的发展简史 答：以技术特征来分可分为：传统生物技术，近代生物技术，现代生物技术 1、传统生物技术阶段 远古人们对微生物的利用，酿造技术 1680年发现了微生物、揭示了发酵现象的奥秘 19世纪末，20世纪30年代出现了工业发酵、开创了工业微生物的新时期 特点：生产过程简单、生产设备要求低、产品多为结构简单的初级代谢产物 2、近代生物技术阶段 1941年，开发研究青霉素 抗生素工业 氨基酸发酵工业 20世纪50年代 酶制剂工业 20世纪60年代 特点 ：产品类型多、生产技术要求高、生产设备规模巨大、技术发展速度快。 3、现代生物技术阶段 1953年watson ,crick.提出生命基本物质DNA双螺旋结构模型 1974年Boyer和Cohen建立了DNA重组技术 1975年，杂交瘤技术（抗体工程） 1977年，基因操作手段获得生长激素抑制因子。胰岛素等克隆。 1982年基因工程产品被投放市场。 2001年人类基因组草图完成 特点：（1）基因操作技术日新月异（2）新技术新方法迅速应用（3）基因工程药物和疫苗研究开发快（4）新的生物治疗制剂产业化前景光明（5）转基因动、植物取得重大突破（6）现代生物技术给农业、畜牧业带来飞跃（7）重要基因的结构和功能研究是今后的研究热点（8）基因治疗取得了大的进展（9）蛋白质工程的发展（10）生物信息学的发展 二、生物技术药物的分类：（1）应用重组DNA技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗药物（2）基因药物（3）动物、植物和微生物的天然药物（4）合成和部分合成的生物药物。 按功能分类（1）治疗药物（2）预防药物（3）诊断药物。 三、生物技术制药的特征：高技术，高投入，长周期，高风险，高收益。 四、利用基因工程技术生产的两个不同途径：1.用克隆的基因表达生产有用的肽类和蛋白质药物或疫苗。2.利用基因工程技术改造传统的制药工业。 五、生物技术所含有的主要技术范畴：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程及生化工程。基因工程是生物技术的核心和关键，是主导技术；细胞工程是生物技术的基础；酶工程是生物技术的条件；发酵工程是生物技术获得最终产品的手段，四个方面相互联系。 六、生物技术概念：以生命科学为基础，利用生物体的特性和功能，设计构建具有预期性状的新物种或新品系，并与工程相结合，利用这样的新物种进行加工生产，为社会提供商品和服务的一个综合性的技术体系。 第二章 基因工程制药 一、基因工程新药：免疫性蛋白，细胞因子，激素，酶类。 二、基因工程技术生产药品的优点（简答）： 1.利用基因工程技术可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（胰岛素，干扰素，细胞因子等）。 2.可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和机构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围。 3.利用基因工程可以发现挖掘更多的内源性生理活性物质。 4.可以弥补内源生理活性物质药物的不足，并对其进行改造。 5.利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。 三、目的基因的获得 原核细胞（较易获得目的基因）基因组较小，可直接分离获得。 基因组→限制性内切酶→水解成若干片段→探针筛选→提纯→扩增 真核生物：一个单拷贝基因仅占整个基因组的10 甚至更少，不易获得。 构建cDNA文库→构建基因文库→人工合成→PCR扩增 四、DNA文库：通过重组、克隆保存在宿主细胞中的各种DNA分子的集合体。文库保存了该种生物的全部遗传信息，需要时可从中分离获得。 五、cDNA文库：以mRNA为模板逆转录出的DNA称cDNA。利用某种生物的总mRNA合成cDNA，再将这些cDNA与载体连接，转入细菌细胞中进行保存和扩增，称cDNA文库。 特点：（1）不含内含子序列。（2）可以在细菌中直接表达。（3）包含了所有编码蛋白质的基因。（4）比DNA文库小的多，容易构建。 如何构建cDNA文库：cDNA以mRNA为模板经逆转录而成，故须选择mRNA丰富、较易获得的、目的基因表达活跃的组织细胞为材料。 （1）修饰cDNA两端接头：人工合成的双链寡核苷酸，二端均为平头或含酶切位点。衔接头：一端为平头，一端为粘末端。 （2）cDNA与载体相连各cDNA各自与一个载体在T4连接酶作用下以粘末端互相连接，即为重组DNA 分子。 （3）导入宿主细胞 重组体在一定条件下导入宿主细胞培养或保存。宿主细胞必须是来自一个细胞的克隆体，以保证它们的遗传性状相同。 六、筛选目的基因 1编码序列富集法。2岛屿获救PCR法。3动物杂交法。4功能克隆法。5构建cDNA文库。6差异显示技术的应用。 七、表达载体具备的条件： 1，载