七氟醚预处理对缺血- 再灌注心肌组织bcl2表达的影响.docVIP

七氟醚预处理对缺血/ 再灌注心肌组织Bcl2表达的影响 【摘要】nbsp; 　　目的：探讨七氟醚预处理对缺血/ 再灌注心肌组织保护作用的机制。方法： 制备心肌缺血/ 再灌注损伤模型,将24只新西兰白兔随机分成对照组、缺血预处理组、七氟醚预处理组。实验完毕后，将各组动物心肌组织做组织切片,采用免疫组织化学方法观察各组动物心肌细胞内Bcl2水平的表达,利用HPIAS2000图像分析系统测定Bcl2在以上3组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果: Bcl2在缺血预处理组和七氟醚预处理组心肌细胞内的表达高于对照组, 差异有显著性( Plt;0. 05) ;缺血预处理组心肌细胞内Bcl2表达水平与七氟醚预处理组相比，差异无显著性(P＞0.05)。结论：七氟醚预处理对缺血再灌注的在体兔心肌具有重要的保护作用。 【关键词】nbsp; 七氟醚; 预处理; 再灌注损伤; 心肌 　　七氟醚是一种较新的吸入麻醉药,诱导迅速、刺激性小、溶解度低,并且吸收和清除迅速。近年来,有研究报道吸入麻醉药安氟醚、氟烷、异氟醚、七氟醚、地氟醚除了具有优良的麻醉作用外,还具有较好的心肌保护作用［1～3］ ，并且在动物实验中发现氟烷、安氟醚、异氟醚、地氟醚能模拟心肌预处理效应,减轻心肌缺血/ 再灌注损伤［4］,但尚未见有关七氟醚预处理对缺血/ 再灌注心肌组织Bcl2表达的影响。我们采用免疫组织化学方法检测了七氟醚预处理对缺血/ 再灌注心肌组织Bcl2表达的影响,进一步探讨七氟醚预处理对心肌缺血/ 再灌注损伤的影响及其可能的机制。 　　1nbsp; 材料与方法 　　1.1nbsp; 模型制备 nbsp;nbsp;nbsp; 　　选用健康新西兰白兔(3～3. 5kg) 24只,雌雄不限,肌注氯胺酮70 mg·kg-1 。颈部正中分离气管并切开插管,用DH2140动物呼吸机进行100%纯氧机械通气,控制呼气末二氧化碳分压在4～4.5 kPa之间。分离颈外静脉置20号管,持续滴注乳酸林格氏液20 ml·kg-1·h-1 ,必要时加少量碳酸氢钠以维持血液pH 值在7.35～7.45之间。麻醉维持用微量泵泵注咪唑安定0.05～0.1mg·kg-1·h-1 ,氯胺酮2～5 mg·kg-1·h-1和维库溴胺0.05～0. 1 mg·kg-1·h-1 。分离颈动脉,置22 号管连接换能器测压。正中劈开胸骨,切开心包,缝线绕过左冠状动脉前降支近端深面并用胶管将其套住。拉紧套管即阻断冠状动脉,表现为心肌局部青紫,心电图ST 段上升。放松套管,局部反应性充血,表明心肌再灌注。通过左心耳穿刺置入20 号管至左心室,并连接换能器测压。 　　1.2nbsp; 实验分组 nbsp;nbsp;nbsp; 　　完成上述手术步骤后稳定30min ,将白兔随机分成对照组、缺血预处理组、七氟醚预处理组,每组8 只。对照组在45 min后阻断冠脉3h ,随后再灌3h。缺血预处理组先行3次每次5 min 的冠脉阻断,每两次之间再灌5min ,预处理后稳定20min ,然后阻断3h ,再灌3h。七氟醚组用麻醉机(ohmeda) 吸入2 %七氟醚30 min后,洗脱15min ,然后阻断冠脉3h ,再灌3h。其余步骤同对照组。加用吸入麻醉药的组在吸入麻醉药期间停用静脉麻醉药,以维持麻醉水平相对稳定。呼出气中二氧化碳和麻醉药浓度用麻醉气体监测仪(RGM5250 , England) 监测。以上各组动物实验完毕后,将各组动物从心底部剪取心脏,切下心室,进行标本制备。 　　1.3nbsp; 主要试剂和仪器 　　1.3.1nbsp; 主要试剂nbsp; 即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒，DAB显色试剂盒及多聚赖氨酸（北京中山生物技术有限公司）；浓缩型鼠抗兔Bcl2单克隆抗体（美国Santa Cruz公司）。 　　1.3.2nbsp; 主要仪器nbsp; YWY781型医用微波仪（250 W，50 Hz），浙江临安电子器材厂生产；家用高压锅。 　　1.4nbsp; 方法 nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 　　免疫组织化学SP法检测Bcl2相关抗原主要步骤：5μm组织切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢处理10 min以抑制内源性过氧化物酶活性，Bcl2采用微波修复抗原，正常羊血清处理10min以减少非特异性背景，一抗4℃孵育过夜，生物素标记的二抗处理10min，链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶复合物处理10min，DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应，苏木精复染，脱水、透明、封片。用PBS代替一抗作为阴性对照组，已知阳性组织作为阳性对照。 　　1.5nbsp; 免疫组织化学结果判断nbsp;nbsp;