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乳腺癌组织中ERα、ERβ蛋白表达及其意义 nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 作者：蔡红兵，陈惠祯，侯汉英，汪必成 【摘要】nbsp; ［目的］ 探讨雌激素受体亚型在乳腺癌发生和发展中的作用。［方法］ 应用免疫组化技术及医学图像分析仪检测正常乳腺组织（30例）、单纯性增生组织（26例）、不典型增生组织（22例）及乳腺癌组织（26例）中ERα、ERβ及Ki67的阳性细胞百分率及灰度值，分析相应抗体的表达量。［结果］ ①与正常乳腺组织比较，乳腺癌患者组织中ERα阳性细胞百分率（58.34±64.43）及灰度值明显升高（102.17±11.89）（P＝0.05，P=0.07）；②ERβ的阳性细胞百分率在正常乳腺组织（58.40±63.36）中高于不典型增生组织（37.79±33.35）（P＝0.047），而后者又高于乳腺癌组织（18.42±49.24）（P＝0.001），ERβ的灰度值在正常乳腺组织（91.63±104.68）中也高于不典型增生（62.09±111.05）（P＝0.035）；③不典型增生周围组织及癌旁组织中ERβ的表达水平高于病变组织中；④Ki67的表达水平与ERβ的表达呈负相关（rs=－0.61，P=0.001），与ERα表达无显著性相关（rs=－0.013，P=0.989）。［结论］ 在乳腺癌发生的不同病理阶段ERβ表达量是逐渐降低的，推测ERβ的表达降低与乳腺癌的发生有关。 【关键词】nbsp; 乳腺肿瘤 nbsp;nbsp;nbsp; 随着乳腺癌中ERα、ERβ相继被发现，该受体得到了广泛的研究，但大多数是对mRNA水平的表达变化的研究。ERβ的表达水平比ERα低得多，获得高特异性的ERβ单克隆及多克隆抗体较为困难，因此，ERβ蛋白水平的研究相对缓慢，直到2000年才开始有零星的报道[1]。 nbsp;nbsp;nbsp; 近年来对ERβ研究的深入，人们认为受体真正发挥作用要有蛋白的表达和功能，因此ERβ蛋白水平的研究同样或更为重要。本研究应用免疫组化技术及图像分析仪检测正常乳腺组织、不典型增生及乳腺癌组织等不同病理变化过程中ERα和ERβ蛋白表达量的变化，以探讨ERα和ERβ在乳腺癌发生、发展中的作用及意义。 nbsp;nbsp;nbsp; 1nbsp;nbsp; 材料与方法 nbsp;nbsp;nbsp; 1.1nbsp;nbsp; 研究对象 nbsp;nbsp;nbsp; 收集2001年1月～2003年12月期间武汉大学中南医院妇科的手术标本，每例样本均作病理确诊。其中乳腺纤维瘤（取其正常乳腺组织）30例、乳腺增生（单纯性）26例、不典型增生22例、乳腺癌标本68例。组织经甲醛固定，石蜡包埋备用。所有患者术前均未经过治疗。 nbsp;nbsp;nbsp; 1.2nbsp;nbsp; 方nbsp;nbsp; 法 nbsp;nbsp;nbsp; 1.2.1nbsp;nbsp; 主要试剂 nbsp;nbsp;nbsp; 单克隆抗体ERα和ERβ抗体：美国Sanata Cruz公司生产。常规免疫组化试剂盒SP及 Ki67抗体：福州迈新试剂公司生产。 nbsp;nbsp;nbsp; 1.2.2nbsp;nbsp; 实验方法 nbsp;nbsp;nbsp; 分别取手术切除的乳腺组织石蜡块，每块连续切取7张5μm厚的切片，1张HE染色，核实病理诊断，另2张应用SP试剂盒进行免疫组化染色。分别用兔抗大鼠ERα、ERβ及Ki67抗体，孵育切片（4℃，过夜），再用生物素化的鼠抗兔二抗孵育30min，37℃，DAB显色5～10min。每步骤间用0.01mol/L PBS 充分洗涤，常规脱水、透明、封片、镜下观察、摄片。另一张不加抗体作为阴性对照。在显微镜下观察形态学变化，染色成棕黄色颗粒者为阳性，每张切片随机取5个视野，计算每视野中每100个细胞中阳性细胞数（百分数），其平均值为该张切片的表达水平。使用医学图像分析仪（TN-8502 Image Analysis System）测定细胞灰度值，用OS-9数据分析软件分析相应抗体的表达量，每张切片随机取5个视野，其平均值为该张切片的灰度值。 nbsp;nbsp;nbsp; 1.3nbsp;nbsp; 统计分析 nbsp;nbsp;nbsp; 应用SPSS 10.0软件包，对各组间的细胞阳性百分率，采用Kruskal-Wallis检验，配对资料采用Wilcoxon检验，灰度分析采用t检验，相关分析采用Spearman分析，Plt;0.05认为差异有显著意义。 nbsp;nbsp;nbsp; 2nbsp;nbsp;