2-1微生物的实验室培养3例析.ppt

课题一 微生物的实验室培养 特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用. 微生物包括哪五类： 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物 原核生物界 原生生物界 真菌界 病毒界 一、基础知识： (一)微生物 ：是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称． 1.何为培养基？不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养成分？有何作用？请举例说明。 2.无菌技术包括哪些方面？消毒和灭菌的区别？常用的消毒方法有哪些？常用的灭菌方法有哪些？ 自主学习: 培养基和无菌技术 一、培养基 1概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 固体培养基 —用于微生物的分离、计数、鉴定 液体培养基 —常用于工业生产 分类 培养基 （1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分分：天然培养基和合成培养基。 1.培养基的类型 微生物需要的营养物质 （1） 一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质 （2）还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质 (例如生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素)以及氧气、渗透压等的要求。 选择题 下列关于微生物的营养的说法，正确的是（ ） A、同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B、凡是碳源都能提供能量 C、除水以外的无机物仅提供无机盐 D、无机氮源也能提供能量 1、消毒 使用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。 2、灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内所有的微生物，包括芽孢和孢子。 二、无菌技术 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌. 常用的消毒方法 1、煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒 4、氯气消毒水源 5、紫外线消毒 …… 二、无菌技术 1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160 ℃ -170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min。 常用的灭菌方法 二、无菌技术 （一）制备培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 1. 计算 2．称量 3．溶化 4．灭菌 5．倒平板 三、实验操作 倒平板技术 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 （二）纯化大肠杆菌 平板划线法 稀释涂布平板法 常用的微生物接种方法： 微生物的接种技术 平板划线法 微生物的接种技术 稀释涂布平板法 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 第一步灼烧是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 涂布平板的所有操作都应在火焰附近